水杨酸钠对耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体内化作用的影响

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目的:探讨水杨酸钠对耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)的NMDA受体(N-methyl-D-as-partate)的表达情况,及其对受体内化的影响;并初步探讨NMDA受体内化作用在水杨酸钠诱导的耳蜗毒性中的作用机制,明确SGN自身对水杨酸钠介导的耳毒性是否具有一定的调控作用。方法:分离取出大鼠蜗轴螺旋管,用酶消化法原代培养SGN,免疫荧光染色检测SGN具有NMDA受体亚单位NR1的表达;然后采用细胞表面生物素化标记SGN表面蛋白,分别提取SGN表面蛋白与总蛋白,采用Western blot检测水杨酸钠作用5min、15min、30min、1h、3h、6h不同时间段SGN的NMDA受体亚单位NR1总蛋白及表面蛋白表达情况。结果:通过免疫荧光观察到原代培养的SGN上有NMDA受体亚单位NR1的表达。通过western blot技术检测到:和空白对照组相比,浓度为5mM的水杨酸钠处理SGN5min、15min、30min前后,SGN总的NR1蛋白表达没有明显改变(p>0.05),但是SGN表面蛋白中NR1表达量明显下降(P<0.05),这提示细胞表面NR1的内化作用明显。随着水杨酸钠处理时间的延长(1h-6h),SGN总的NR1蛋白表达明显增加(P<0.05),呈一定的时间依赖关系。而此时增强的NR1内化作用趋于稳定。动力蛋白抑制肽(Dynamin inhibitory peptide,DIP)对水杨酸钠增强的NR1内化作用有明显的抑制作用。结论:水杨酸钠作用SGN早期可增加NMDA受体内化作用,后期增加NMDA受体表达,水杨酸钠增强的NMDA受体内化是受动力蛋白或者网格蛋白调节。
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