寒葱多酚的提纯及对氧化损伤小鼠的保护作用

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寒葱(Allium Victorialis L.AV)中多酚、黄酮类物质含量丰富,是可作为外源性抗氧化剂的天然原料,然而目前寒葱的研究多集中于寒葱的栽植、腌制品酱类的简易加工、抗炎等一些功能性的研究,鲜见寒葱多酚的提纯极其抗氧化研究。因此,本试验以新鲜寒葱为试验原材料通过水提法得到寒葱多酚粗提物,之后利用大孔树脂提纯粗提物中的多酚并着重研究其体内抗氧化性。研究结果如下:1.寒葱粗提物中多酚的提纯:以静态吸附率解吸率及动态吸附率解吸率为指标,通过比较五种大孔树脂,最终确定AB-8为最优大孔树脂。利用单因素实验法,得到最佳寒葱多酚提纯条件为:大孔树脂吸附寒葱粗提液的多酚浓度为0.9 mg/mL,pH=5,上柱体积保持在90 ml,层析柱的流入流出速度都控制在1.0 mL/min,选用无毒无害的80%的乙醇作为层析柱洗脱剂,洗脱体积保持在200 mL作为寒葱多酚洗脱条件。经过提纯,寒葱多酚的纯度从2.74%上升至36.09%,纯度提升了近13倍。2.寒葱多酚的体外抗氧化活性:寒葱多酚提纯物和粗提物对三价铁离子都有较高的还原力,对DPPH·自由基和ABTS·+自由基具有较强的清除能力,且均呈现剂量依赖性。寒葱多酚提纯物对DPPH·自由基清除率IC50值为7.91 ug/mL,分别是Vc和粗提物的0.56倍、0.02倍。寒葱多酚提纯物对ABTS·+清除率IC50值为72.87 ug/mL,是Vc和粗提物的2.07倍、0.51倍。寒葱多酚提纯物对三价铁离子的还原力IC50值为171.59 ug/mL,是Vc和粗提物的2.18倍和0.34倍。3.寒葱多酚的体内抗氧化活性:将实验小鼠腹腔注射D-Gal 35d建立氧化损伤模型,之后进行灌胃试验,连续30 d后,采集血清、肝脏和脑组织存于-80℃冰箱。试验结果表明,寒葱多酚的低、中、高剂量组与模型组相比:显著提高了小鼠的脏器系数,其中高剂量组的肝脏、心脏、肾脏和脾脏指数分别达到了 48.06、5.10、12.50、5.12,优于Vc对照组,已恢复到了正常组水平;显著提高了小鼠血清、肝脏和脑组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活力,以及显著降低了丙二醛(Malondialdehyde.MDA)的含量,其中高剂量组的酶活性高于Vc对照组,MDA含量低于Vc组;显著降低了小鼠血清和脑组织中 8-羟基鸟嘌呤(8-hydroxy-2’-desoxyguanosine,8-OH-d G)、5-羟基胞嘧啶(5-hydroxy-2’-deoxycotosine,5-OH-d C)的含量,其中血清高剂量组中 8-OH-d G的含量为28.11 ng/L,已恢复到了正常组25.84 ng/L水平;显著降低了小鼠血清和肝脏组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素IL-6的含量(P<0.05),其中中剂量组和高剂量组的效果优于Vc对照组;肝脏组织也得到了不同程度的修复,且高剂量组基本恢复到正常组情况。
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