目的本研究建立吗啡成瘾大鼠模型,以奖赏通路中伏隔核作为研究切入点,运用分子生物学和行为学方法,探讨大鼠伏隔核PKMζ在吗啡成瘾中的作用。以期进一步明确成瘾记忆的机制,为有效地干预、减弱或擦除成瘾记忆和开发治疗成瘾复吸的医疗措施提供新思路。方法(1)采用条件性位置偏爱装置和非倾向性训练程序建立吗啡成瘾大鼠模型。通过旷场实验方法评价吗啡成瘾对大鼠探究行为的影响。(2)运用Western blot方法检测吗啡成瘾大鼠伏隔核PKMζ的表达。(3)吗啡成瘾大鼠伏隔核行脑立体定位置管术,微量注射PKMζ抑制剂ZIP(0.5μM,每侧5μl),持续观察其偏爱分值的变化,明确ZIP对成瘾记忆消退和复吸的作用。(4)Western blot检测吗啡成瘾大鼠伏隔核H3乙酰化水平;吗啡成瘾大鼠离体伏隔核脑片灌流HDAC抑制剂TSA(80μM)30min检测伏隔核PKMζ的表达,探究成瘾记忆形成过程中PKMζ的表达与组蛋白乙酰化的关联。结果(1)吗啡诱导大鼠条件性位置偏爱效应显著增强(p<0.05),形成成瘾记忆,提示吗啡成瘾动物模型成功建立。(2)旷场实验结果显示吗啡成瘾大鼠的自主运动总路程和中央区域运动路程均减少,显著低于对照组(p<0.05),提示吗啡成瘾大鼠的探究行为减少。(3)Western Blot结果显示吗啡成瘾组大鼠伏隔核PKMζ和p-PKMζ表达显著高于对照组(p<0.05),提示伏隔核PKMζ参与大鼠吗啡成瘾过程,其表达和活性在吗啡成瘾过程中有重要作用。(4)伏隔核微量注射PKMζ抑制剂ZIP能够促进吗啡成瘾大鼠条件性位置偏爱效应的消退(p<0.05),并对大鼠吗啡成瘾消退后复吸具有抑制作用(p<0.05)。(5)Western Blot结果显示吗啡成瘾大鼠伏隔核组蛋白H3的乙酰化水平显著高于对照组(p<0.05),说明伏隔核组蛋白H3乙酰化水平升高在吗啡成瘾大鼠的成瘾记忆形成中有重要作用。(6)组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA使吗啡成瘾大鼠伏隔核PKMζ表达增高(p<0.05),说明吗啡成瘾大鼠伏隔核PKMζ表达增加可能与组蛋白H3乙酰化修饰增强有关。结论伏隔核PKMζ参与大鼠吗啡成瘾的过程,其特异性抑制剂ZIP可促进吗啡成瘾消退并抑制复吸;吗啡成瘾大鼠伏隔核PKMζ表达增加可能与组蛋白H3乙酰化修饰增强有关。