义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)隶属于动物界(Animalia)、脊索动物门(Chordata)、两栖纲(Amphibia)、有尾目(Caudata)、小鲵科(Hynobiidae)、小鲵属(Hynobius)。属中国特有物种,受胁等级为“易危”(VU)。当前对该物种的研究主要集中在组织学,系统分类,核型分析,遗传分化等方面,但对其栖息地调查,种群数量统计,繁殖生物学等研究均不足。为更好的保护野生种群资源,维持生物多样性,本研究从资源调查、胚胎发育及遗传学角度出发,调查研究了位于浦江县、义乌市境内义乌小鲵种群的分布情况、生境状况;并采集亲本,通过室内配种获得卵袋,对其胚胎发育过程及最适孵化条件进行记录与研究;此外,利用线粒体D-loop分子标记技术,分析浦江县、义乌市境内4个采样点的107个义乌小鲵个体的遗传多样性情况,为其日后科学的保护与管理提供依据。主要研究结果如下:(1)资源调查1)自2017年以来,通过对浦江县、义乌市全境的调查,相继发现包括章山、里黄、里美、市林场等义乌小鲵野外栖息地共计15处(浦江7处,义乌8处),确定义乌小鲵实际分布范围14.50 km2(浦江10.75 km2,义乌3.75 km2),共计调查到成体11尾,幼体4151尾,卵袋338对(浦江成体9尾,幼体2509尾,卵袋189对;义乌成体2尾,幼体1642尾,卵袋149对)。除此之外,其余调查区域均未发现义乌小鲵幼体、亚成体、成体和卵袋。在所有栖息地中,评估其中7处(浦江4处,义乌3处)受到不同程度的人为干扰影响。2)通过地毯式绝对数量统计法并假设参与繁殖的雌雄小鲵成体性比为1:1,根据统计到的卵袋数推测成体数量。以幼体数加成体数定义种群数量,确定浦江县境内义乌小鲵高密度分布区包括章山栖息地(种群数1123尾,密度1018尾/km2)、嵩溪栖息地(种群数540尾,密度2076尾/km2);低密度分布区包括里黄栖息地(种群数1176尾,密度529尾/km2)、东岭栖息地(种群数93尾,密度26尾/km2)、塘坞栖息地(种群数49尾,密度21尾/km2)及塘岭头栖息地(种群数11尾,密度14尾/km2)。义乌市境内高密度分布区包括里美栖息地(群数335尾,密度1080尾/km2)、市林场栖息地(种群数373尾,密度1094尾/km2);低密度分布区包括黄山栖息地(种群数393尾,密度427尾/km2)、望道栖息地(种群数664尾,密度845尾/km2)、对坞栖息地(种群数30尾,密度63尾/km2)、瓦窑栖息地(种群数66尾,密度182尾/km2)及东珠栖息地(种群数71尾,密度125尾/km2)。3)通过对浦江县、义乌市全境的调查,确定义乌小鲵栖息地位于海拔150～500 m的丘陵山地内,偏好阴暗湿润的环境,主要生活在充满枯枝落叶的竹林、阔叶林以及针阔混交林内,栖息地内自然植被类型可分为针叶林、针阔混交林、阔叶林、经济林、灌丛、草丛及水生植物层这7个植被型组,10个植被型,22个群系组,22个群系。4)在两地(浦江县、义乌市)的义乌小鲵分布区内,基于土壤类型、郁闭度、水体清晰度等16种生境因子,通过78个样方(24个选择样方和54个对照样方),研究繁殖期义乌小鲵的生境选择,结果显示选择样方与对照样方在岸边条件、水中覆盖物、水体清晰度、水体温度、水体面积、植被盖度6种生态因子上差异显著。逐步判别表明,通过植被盖度、水体温度、水体面积3个生态因子可分辨选择样方和对照样方,正确判别率达72.9%;逐步回归分析结果显示义乌小鲵在繁殖期生境选择与水体pH显著正相关,与水温呈显著负相关,确定义乌小鲵繁殖期间偏好的微生境为低郁闭度、较小面积水体、较低水温、多水中覆盖物、复杂岸边条件、水体偏弱碱性的静水型水塘或水坑。5)据MAXENT生态位模型输出的预测结果显示,对该模型贡献率最大的是降雨量季节性变化(BIO15),占所有环境变量总贡献率的42.3%,其次是最湿季降水量(BIO16)32.4%,其余环境变量的贡献率较小或为零。具体预测结果如下,位于浦江县的高适宜区分布在花桥乡、前吴乡、浦南街道等地,面积108.34 km2,占浦江县总面积的11.8%;次适宜区位于杭坪镇、仙华街道等地,面积191.90 km2,占总面积的20.9%;低适宜区分布在虞宅、岩头、郑宅等地区,面积205.67 km2,占总面积的22.4%;不适宜区主要分布在大畈、檀溪镇、郑家坞等地区,面积413.17 km2,占总面积的45.0%。位于义乌市的高适宜区主要分布于上溪镇以北、城西街道以北,赤岸镇以南等地,面积仅49.75 km2,占义乌市总面积的4.5%;次适宜区位于上溪镇、城西街道中部,大陈镇及苏溪镇等地,面积127.13 km2,占总面积的11.5%;低适宜区主要分布在上溪以南、义亭镇、后宅街道以北、佛堂镇以东等地,面积262.00 km2,占总面积的23.7%;不适宜区分布在福田街道、稠城街道、稠江街道、廿三里街道等地区,面积666.59 km2,占总面积的60.3%。(2)胚胎发育观察义乌小鲵的早期胚胎发育分为26个时期,在水温10±1℃(模拟自然水温)条件下,胚胎发育缓慢,历时约1088 h孵出。(3)最适孵化条件选择在水深5 cm,水温15±1℃,密度4000颗/m2条件下,义乌小鲵胚胎有最优的孵化率(99.57±0.75%)及孵化用时(115.4±56.0 h);控制光照强度在1500 lx,每日光照时长12 h(7:30～18:00),此条件下义乌小鲵胚胎孵化率(96.7±3.3%)最大,而孵化用时(145.8±5.7 h)最短。(4)遗传多样性分析1)基于线粒体D-loop区检测义乌小鲵遗传多样性,结果显现其遗传多样性水平低。在107条序列中,筛选获得单倍型6个。所有义乌小鲵样本的单倍型多态性为0.3232,核苷酸多态性为0.00587。2)利用线粒体D-loop区分子标记检测义乌小鲵种群的遗传分化。线粒体数据分析分化系数(FST)范围在-0.00584～0.05128间,检测结果中,FST为负,推测原因是样地间差异小于样地内部差异。且分析的结果表明几个样地间存在显著的基因交流。对义乌小鲵进行AMOVA遗传变异分析,结果显示义乌小鲵样地的遗传变异来自于样地内部个体间的变异,样地间的分化不显著。3)利用线粒体D-loop区探究义乌小鲵种群历史动态。其种群的Tajima’s D值<0,Fu’S Fs值<0,结果未达显著水平(P>0.10),这表明浦江县、义乌市的义乌小鲵种群的中性进化歧异度没有出现显著偏向。Fu Fs值为负(-3.230),指示近期出现遗传变异。