针灸对荷瘤小鼠化疗后骨髓细胞DNA修复蛋白MGMT、POL-β的影响

来源 :河南中医学院 河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qweasd21
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目的:本课题采用S180荷瘤小鼠腹腔注射环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)造成骨髓抑制模型,观察第2天、4天、6天CTX荷瘤小鼠外周血白细胞计数、骨髓细胞DNA修复蛋白MGMT、POL-β的表达量,通过对上述指标的分析,探讨针灸减轻化疗不良反应,保护骨髓造血细胞,改善骨髓抑制与骨髓细胞DNA修复之间的相关性,从而揭示针灸改善化疗致骨髓抑制,提升外周血白细胞的分子生物学机制,也为探索针灸在肿瘤相关疾病中的应用提供实验室依据。  方法:选用清洁级,雄性,体重22±2g的昆明种(KM)小鼠96只,先用S180肉瘤细胞在小鼠的右腋下植瘤,5天后再根据体重把荷瘤小鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组。针刺组、艾灸组、模型组小鼠一次性腹腔注射CTX150mg/kg,即按照小鼠体重0.02ml/g用药量CTX溶液浓度为7.5mg/ml,停药后4h即造出模型[1]。空白组小鼠按照0.02ml/g剂量腹腔注射0.9%生理盐水,时间与造模各组时间同步。造模结束后4小时针刺组、艾灸组按造模时间顺序进行治疗。选用“大椎”、“膈俞”、“肾俞”、“足三里”。模型组、空白组陪同抓取、固定。按治疗时间的先后顺序,在第2天、第4天、第6天治疗后各随机处死一批小鼠取材。分别用人工镜检检测外周血白细胞计数、免疫组织化学的方法检测骨髓细胞DNA修复蛋白MGMT、POL-β表达量。  结果:  1.针灸改善荷瘤小鼠化疗后骨髓抑制,升高白细胞的疗效确切。注射CTX的各组荷瘤小鼠从注射CTX后的第2天白细胞就开始下降,第3天模型组、针刺组、艾灸组白细胞计数降至最低,第4天开始回升,第5天模型组、针刺组、艾灸组白细胞数均已超过基础白细胞水平,且针刺组、艾灸组白细胞数高于模型组。第2天、第4天、第6天针刺组高于艾灸组,但无显著性差异(P>0.05)。  2.针刺和艾灸可以提高荷瘤小鼠化疗后骨髓组织细胞MGMT蛋白的表达。第2天,模型组、针刺组、艾灸组骨髓细胞MGMT蛋白表达均高于空白组,针刺组与艾灸组低于模型组;第4天,针刺组、艾灸组均高于模型组,且针刺组有显著性差异(P<0.05),第6天,针刺组、艾灸组均高于模型组,均无显著差异。针刺组与艾灸组比较,第2天、第4天MGMT蛋白的表达针刺优于艾灸,第6天艾灸优于针刺,但均无显著性差异(P>0.05)。  3.针刺和艾灸可以提高荷瘤小鼠化疗后骨髓组织细胞POL-β蛋白的表达。第2天、第4天、第6天针刺组、艾灸组荷瘤小鼠化疗后骨髓细胞POL-β蛋白表达高于模型组,第4天有显著性差异(P<0.05);第2天,针刺组高于艾灸组,第4天、第6天低于艾灸组,均无显著性差异(P>0.05)。  结论:  1.针灸改善荷瘤小鼠化疗后骨髓抑制,升高白细胞的疗效是确切的,针刺和艾灸两种方法比较没有显著差异。  2.针灸提高了荷瘤小鼠环磷酰胺化疗后骨髓细胞DNA直接修复蛋白MGMT的表达,从而可以促进受损骨髓细胞DNA的直接修复,改善骨髓抑制。  3.针灸提高了荷瘤小鼠环磷酰胺化疗后骨髓细胞DNA切除修复蛋白POL-β的表达,从而促进受损骨髓细胞DNA的碱基切除修复,改善骨髓抑制。  4.针刺促进CTX荷瘤小鼠骨髓细胞蛋白表达的作用快于艾灸,艾灸虽然起效较慢,但后期作用较针刺明显。  5.针灸促进CTX荷瘤小鼠的骨髓细胞修复蛋白的表达作用有较好的作用趋势,但统计结果表明显著性差异较少,这可能与本实验所用研究样本量小有直接关系。
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