【摘 要】
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伯基特淋巴瘤是一种高度侵袭性的B细胞非霍奇金淋巴瘤。使用高强度的化疗可以有效地治疗伯基特淋巴瘤,特别是针对较年轻的患者。然而,老年人和免疫缺陷患者的治疗效果较差,这突显了寻找替代疗法的必要性。PHLPP2是PI3K/AKT信号通路的负调控因子,可以直接去磷酸化AKT的Ser473位点。目前已有研究表明,PHLPP2在多种实体肿瘤中异常表达,上调PHLPP2的表达可发挥其抑癌因子的作用,抑制肿瘤细胞
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伯基特淋巴瘤是一种高度侵袭性的B细胞非霍奇金淋巴瘤。使用高强度的化疗可以有效地治疗伯基特淋巴瘤,特别是针对较年轻的患者。然而,老年人和免疫缺陷患者的治疗效果较差,这突显了寻找替代疗法的必要性。PHLPP2是PI3K/AKT信号通路的负调控因子,可以直接去磷酸化AKT的Ser473位点。目前已有研究表明,PHLPP2在多种实体肿瘤中异常表达,上调PHLPP2的表达可发挥其抑癌因子的作用,抑制肿瘤细胞的增殖、阻滞细胞的周期进程和诱导细胞的凋亡。本课题旨在探寻PHLPP2在伯基特淋巴瘤细胞的生物学功能,从新的视角寻找伯基特淋巴瘤靶向治疗的目标,为临床治疗提供新的理论依据。课题的研究分为以下两部分:第一部分PHLPP2稳定过表达的伯基特淋巴瘤细胞株的构建目的:构建PHLPP2过表达慢病毒载体,筛选稳定过表达PHLPP2的CA46及RAJI细胞株。方法:1、应用PCR法获取PHLPP2 cDNA,连接载体,进行测序验证;2、包装及浓缩慢病毒,应用流式细胞术检测慢病毒滴度;3、慢病毒感染CA46及RAJI细胞,荧光显微镜下观察感染效率,puromycin筛选,应用RT-PCR法和Western blot法检测PHLPP2 m RNA和蛋白表达水平。结果:1、构建PHLPP2过表达慢病毒载体,测序结果正确;2、建立稳定过表达PHLPP2的CA46及RAJI细胞株,m RNA和蛋白水平验证筛选成功。结论:成功构建PHLPP2稳定过表达的伯基特淋巴瘤细胞株。第二部分PHLPP2过表达对伯基特淋巴瘤细胞的增殖、周期和凋亡的影响及机制目的:初步探索PHLPP2过表达对伯基特淋巴瘤细胞株增殖、周期和凋亡的影响及机制。方法:1、应用CCK-8法检测PHLPP2过表达对CA46及RAJI细胞增殖的影响;2、应用流式细胞术检测PHLPP2过表达对CA46及RAJI细胞周期的影响,Western blot法检测周期相关蛋白;3、应用Hoechst33342和PI双染法检测PHLPP2过表达对CA46及RAJI细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白;4、Western blot法检测PI3K/AKT信号通路蛋白的变化。结果:1、PHLPP2过表达抑制CA46及RAJI细胞的增殖;2、PHLPP2过表达阻滞CA46及RAJI细胞周期进程,上调P21的表达,下调Cdk4、Cycling D3的表达;3、PHLPP2过表达促进CA46及RAJI细胞的凋亡,使PARP前体表达下调,剪切体表达上调,Bcl-2表达下调,Bax表达上调;4、PHLPP2过表达下调CA46及RAJI细胞p-AKT（Ser473）的表达。结论:PHLPP2过表达抑制伯基特淋巴瘤细胞AKT（Ser473）的磷酸化,阻滞PI3K/AKT信号通路的传导,抑制细胞的增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞的凋亡,Bcl-2家族和Caspase家族参与细胞凋亡的调控。
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