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目的：1用不同浓度的Aβ25-35刺激C6细胞，观察细胞活力和形态及检测硫氧还蛋白结合蛋白-2(thioredoxin binding protein, TBP-2)、硫氧还蛋白(thioredoxin, TRX)、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products，RAGE)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(low-density lipoprotein receptor-related protein，LRP1)表达的改变，为建立AD细胞模型提供依据。2用不同浓度的六味地黄丸含药血清（Liuweidihuang serum, LWDHS）刺激C6细胞，观察细胞活力和细胞形态及检测TBP-2、TRX、RAGE、LRP1表达的改变，筛选出合适的LWDHS含药血清浓度，为研究中医药（LWDHS）对AD细胞模型产生的影响提供依据。3用筛选的合适浓度的LWDHS含药血清干预AD细胞模型，观察六味地黄丸含药血清（LWDHS）对AD细胞模型细胞活力和细胞形态及TBP-2、TRX、RAGE、LRP1表达的影响，并探讨其作用的分子机制。方法：1制备Aβ25-35蛋白溶液：用无菌超纯水将1mg的Aβ25-35配制成1000μmol/L母液，将其置于37℃培养箱中进行“老化”5d，分装-80℃保存，使用前稀释到所需工作浓度。2将Aβ25-35蛋白溶液分为0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L五个浓度组干预C6细胞24后，用MTT法检测Aβ25-35对C6细胞活力的影响，并观察细胞形态的变化；用Western Blot方法检测Aβ25-35对C6细胞中TBP-2、TRX、RAGE、LRP1蛋白表达的变化。3制备含药血清：SD雄性大鼠（250±20g），六味地黄丸浓缩丸（宛西制药），1.08g/kg灌胃，每天2次，第4天早上灌胃后2小时腹主动脉取血制备LWDHS。4将LWDHS分为2.5%、5%、10%、20%、30%五个浓度组作用C6细胞24h后，筛选对C6细胞活力增强的最佳血药浓度，并观察细胞形态变化及Western Blot方法检测相关蛋白TBP-2、TRX、RAGE、LRP1蛋白表达变化。5取最佳浓度LWDHS干预Aβ25-35作用AD细胞模型，显微镜观察细胞形态、活力及Western Blot方法检测TBP-2、TRX、RAGE、LRP1蛋白表达变化。结果：1用不同浓度Aβ25-35刺激C6细胞后，细胞活性及存活率显著降低（P<0.05）。显微镜下观察细胞形态：Aβ25-35刺激的C6细胞与正常C6细胞相比，随着Aβ25-35剂量增高，C6细胞数目减少，细胞胞体缩小，突起变短，有细胞碎片出现和凋亡/死亡细胞逐渐增多，呈现剂量依赖性改变。蛋白表达结果表明：TBP-2和RAGE蛋白表达明显增加，与之相反的是TRX和LRP1的蛋白表达明显呈降低趋势。2用不同浓度LWDHS干预C6细胞后，细胞活性及存活率显著升高。显微镜下观察细胞形态，随着LWDHS浓度增高，C6细胞数目增多，细胞聚集融合成单层，细胞的胞突明显变大，突起数目增多，突起增粗增长。同时观察LWDHS20%、30%浓度组，胞体变大，数目不再增多，呈分化趋势。Western Blot检测蛋白表达结果显示：TBP-2、RAGE随着血药浓度的增加蛋白表达明显降低；而TRX、LRP1的蛋白表达随着血药浓度的增加而增加，均成剂量依赖。3LWDHS预刺激能够抑制Aβ25-35引起的细胞存活率下降，显微镜下观察细胞形态：与正常对照组相比，Aβ25-35组C6细胞细胞数减少，细胞突起变短，有凋亡细胞出现；LWDHS干预组凋亡细胞减少，细胞胞体增大，突起增长。LWDHS抑制Aβ25-35诱导TBP-2和RAGE蛋白表达的增加，恢复了降低的TRX和LRP1表达。结论：1Aβ25-35对C6细胞毒性损伤与剂量在一定范围内呈正相关，对C6细胞具有明显的细胞增殖活性抑制效应；Aβ25-35通过对TBP-2、TRX、RAGE、LRP1的表达调节，参与启动致病过程。在此过程中，胰岛素信号和PI3K/AKT通路有可能参与了阿尔茨海默病的发病机制。表明氧化应激和炎症反应在Aβ导致阿尔茨海默病发生中起着重要作用。2LWDHS可能通过调节TBP-2、TRX、RAGE和LRP1表达Aβ25-35诱导的细胞凋亡有一定的保护作用；TBP-2/RAGE可能是治疗阿尔茨海默病的重要节点。