论文部分内容阅读
目的:以两亲性聚合物mPEG-DSPE/mPEG-PLA为载体材料制备混合胶束用于运载CDK抑制剂Palbociclib并在表面偶联抗M-CSFR单克隆抗体进而构建出免疫混合胶束,同时对其生物相容性和体外抗肿瘤活性进行初步探究。方法:1.混合胶束的制备及表征:采用薄膜水化法并通过单因素实验对制备工艺优化进而制得粒径分布均匀、载药量高的混合胶束;应用激光粒度分析仪检测其粒径分布、Zeta电位、稳定性;紫外分光光度法测定混合胶束的载药量及体外释放;芘荧光探针法检测CMC;2.免疫混合胶束的制备及表征:将抗M-CSFR单克隆抗体巯基化后偶联到混合胶束表面构建出免疫混合胶束,并使用激光粒度分析仪表征其粒径分布、Zeta电位;紫外分光光度法测定免疫混合胶束的载药量;3.免疫混合胶束生物相容性评价:通过MTT实验检测对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖活性的影响、溶血实验、BSA吸附实验来探究免疫混合胶束的生物相容性;4.免疫混合胶束体外抗肿瘤活性评价:选取人肺癌细胞A549(MCSFR高表达)为细胞模型,采用MTT法检测游离药物与免疫混合胶束对A549肺癌细胞的增殖抑制作用;通过荧光显微镜观察免疫混合胶束对A549细胞的凋亡影响;应用流式细胞仪检测免疫混合胶束对A549细胞凋亡的影响;通过划痕实验检测免疫混合胶束对A549细胞迁移的影响。结果:通过单因素实验优化制备处方从而得到粒径约为155nm且分布均匀、Zeta电位为89.22mV、载药量高达25.39%的混合胶束;抗M-CSFR单克隆抗体巯基化之后有效偶联在混合胶束表面并测定其偶合量约为1.21μg/mg;制备出的免疫混合胶束粒径约为159nm且分布均匀,Zeta电位为78.33mv且载药量为24%;生物相容性实验证明不同浓度的免疫混合胶束的溶血率均小于3%;与游离药物相比免疫混合胶束对蛋白吸附性低且对正常细胞的增殖活性影响较小;免疫混合胶束作用于肿瘤细胞A549时有较强的增殖抑制作用,对肿瘤细胞的抑制作用优于游离药物;此外免疫混合胶束还能提高A549细胞的凋亡并抑制其迁移。结论:成功构建出由抗M-CSFR单抗介导的免疫混合胶束,其粒径分布均匀、性质稳定、生物相容性好;与游离药物相比免疫混合胶束具有更好的抗肿瘤活性。