研究目的1.评价重度EMS对辅助生殖结局的影响,分析其中主要的影响因素,为EMS相关不孕病理机制提供研究方向。2.筛选重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中特异表达的蛋白,研究其对卵母细胞质量的影响。3.从卵母细胞质量这一研究方向,探索内异方治疗EMS相关性不孕症的作用机制。研究方法1.临床研究通过大样本回顾性队列研究,对输卵管性不孕患者（对照组）和不同类型重度EMS相关性不孕症患者体外受精/单精注射-冻胚移植的基线特征、取卵周期和移植周期各项指标进行统计与分析,评价重度EMS对妊娠结局的影响及分析其中主要因素。2.重度EMS相关性不孕症患者卵泡液特异表达蛋白的筛选与验证通过同位素标记相对和绝对定量技术对输卵管性不孕患者和重度EMS相关性不孕症患者卵泡液进行检测,筛查出表达水平异常的蛋白;选择其中与EMS相关的蛋白,通过酶联免疫吸附测定法扩大样本验证其表达水平的差异。3.基于2.实验结果,检测重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中铁离子水平“2.实验结果”发现转铁蛋白（transferrin,TRF）在重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中表达较低,该蛋白与铁转运密切相关。通过ELISA方法检测重度EMS相关性不孕症患者和输卵管性不孕患者卵泡液中铁离子水平,并比较两组TRF饱和度。4.重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中TRF水平变化对小鼠卵母细胞质量的影响在重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中外加TRF（TRF组）,使其TRF水平与对照组（输卵管性不孕患者卵泡液）相当,并设立用抗体阻断TRF的分子功能组（抗体组）,干预小鼠卵母细胞体外成熟、受精和早期胚胎发育,观察卵母细胞成熟、受精和早期胚胎的发育情况。5.内异方对EMS模型小鼠卵母细胞质量的影响构建EMS模型小鼠,对EMS模型小鼠进行内异方干预,观察其自然生育能力,卵泡发育情况,体外培养其卵母细胞成熟,并检测卵泡中TRF的表达情况。研究结果1.EMS组月经第三天血清FSH和E2水平明显高于对照组,而窦卵泡数明显低于对照组,其中卵巢子宫内膜异位囊肿组窦卵泡数明显低于盆腔EMS组。在优势卵泡数、获卵数、成熟卵数、获卵率、有效囊胚率、优质胚胎率和可移植胚胎率方面,EMS组均显著低于对照组,而卵巢低反应的发生率显著高于对照组。在优势卵泡数、获卵数、成熟卵数、获卵率方面,卵巢子宫内膜异位囊肿组均显著低于盆腔EMS组,而在受精率、卵裂率方面显著高于盆腔EMS组。在优势卵泡数方面,手术组均显著低于穿刺组。EMS组流产率和累计临床妊娠率显著低于对照组。2.同位素标记相对和绝对定量技术初步筛查显示,TRF在重度子宫内膜异位症相关性不孕症患者卵泡液（EMS组）中水平显著低于输卵管性不孕患者（对照组）（P=0.043）;酶联免疫吸附测定法结果显示,EMS组（n=31）TRF浓度3.43±0.53（g/L）显著低于对照组（n=27）4.17±0.54（g/L）（P=0.000）。3.EMS组卵泡液铁离子水平（40.14±2.34 umol/L）明显高于对照组（29.46±1.77umol/L）（P<0.001）,且EMS组TRF饱和度为54.8%,存在铁超载。4.EMS组卵母细胞体外成熟率为46.7%,明显低于对照组61.2%（P=0.017）和TRF组65.7%（P=0.001）;抗体组体外成熟率47.1%,明显低于TRF组（P=0.007）。5.内异方组交配实验平均产仔数明显高于其余三组（P均<0.001）;内异方组与EMS组各阶段卵泡所占比例存在统计学差异（P=0.019）,内异方组的有腔卵泡（后期）比例（12.3%）高于EMS组（1.9%）;内异方组卵母细胞体外成熟率（68.3%）明显高于EMS组（51.0%）（P=0.014）。结论1.重度EMS对体外受精/单精注射-冻胚移植（IVF/ICSI-FET）结局产生不良影响,主要反映在一次取卵获得临床妊娠的机率更低（累计临床妊娠率）,其中重要原因之一为卵巢反应降低及获卵数减少,尤其见于卵巢EMS囊肿患者。EMS存在卵巢以外损害卵母细胞质量的因素,导致卵母细胞受精能力、卵裂能力降低。卵巢EMS囊肿的相关手术不会改善IVF/ICSI-FET妊娠结局。2.重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中转铁蛋白水平降低,铁离子水平增高,存在铁超载。3.转铁蛋白水平降低是重度EMS相关性不孕症患者卵泡液阻碍小鼠卵母细胞体外成熟的原因之一。4.内异方可以改善EMS模型小鼠自然生殖能力,促进卵泡发育,提高卵母细胞体外成熟率,说明内异方具有改善EMS卵母细胞质量的作用。