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Rab蛋白是一类小分子GTPase,属于Ras超家族成员,在真核细胞囊泡运输与细胞间信息传递中起到十分重要的作用。目前已经发现的Rab蛋白多数为高尔基体与膜结构相关分子,而且新的Rab蛋白越来越多的被发现和鉴定,但其功能却仍然不十分清楚。近来报道表明许多疾病包括癌症,多囊性疾病等与Rab蛋白异常相关,Rab很有可能成为下一个疾病治疗靶点,因此研究Rab蛋白功能、其发挥功能的机制以及与Rab相互作用的信号以及效应分子具有十分重要的意义。
本室在以往的研究过程中发现了新的Rab26全长cDNA序列(AccessionNo.AY646153),将其克隆至pEGFP-N1质粒并证实其为一膜相关蛋白为了对Rab26功能进行进一步的研究,纯化了Rab26蛋白包涵体,并利用其制备了多克隆抗体,实验证实抗Rab26抗血清具有相当高的抗体效价。此外,本文利用实验室现有的pCDNA-Rab以及pEGFP-Rab质粒转染Hela细胞,并观察了阴性组与实验组再转染后对外源荧光蛋白吞噬功能的差异,发现转染了带有Rab26基因(pCDNA-Rab和pEGFP-Rab)的细胞均呈现增强的蛋白吞噬功能,阴性对照组细胞未观察到对外源蛋白的吞噬,充分说明Rab26蛋白在细胞内具有十分重要的作用。
病毒生活史从结合宿主细胞特异受体进而吸附到宿主细胞开始。对于人类以型肝炎病毒感染,病毒复制和扩增的机制已经有所研究,许多可能的细胞特异性病毒受体,例如免疫球蛋白A受体、白介素6受体、去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoproteinreceptor,ASGPR)、转铁蛋白受体,三磷酸甘油醛脱氢酶以及多聚人类学清白蛋白等等也已经有所报道。但是究竟HBV和细胞特异结合的受体为何物还没有确定的结论。
本室在利用乙肝表面抗原筛查肝细胞噬菌体展示库德过程中发现了一种能够特意与乙肝表面抗原结合的分子,命名为SBP(HB-SBP),实验证实该蛋白与乙肝表面抗原联合免疫Ba1b/c小鼠可显著增强抗体血清水平,可能是新的乙肝病毒受体,并可以作为新型乙肝疫苗增效剂克服乙肝表面抗原的耐受状态。为了进一步明确该蛋白自身在人体充当的角色,本文首先利用生物信息学手段分析了该蛋白的cDNA以及蛋白序列,预测了该蛋白的空间结构及可能的功能域,另外还模拟了该蛋白与乙肝表面抗原小S蛋白的结合模式,为以后实验验证该蛋白体内功能大家基础。
同时本文利用本实验室制备的SBP单克隆抗体,通过组织芯片的方法检测了该蛋白在人体各组织的存在状况,利用ELISA方法在乙肝相关各人群中检测SBP的天然存在,发现在健康人、慢性乙肝患者以及乙肝康复者体内该蛋白的含量具有显著性差异,提示了该蛋白在免疫调节方面的重要功能。
进一步,我们将SBP与BSA蛋白化学交联免疫小鼠,并测定免疫后不同时间内动物学清抗BSA抗体的效价,并与未交联SBP的阴性对照组进行比较,发现SBP,在影响体内抗体水平方面的特殊功能。为进一步开发新型人用免疫调节剂提供了实验依据。