【摘 要】
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目的:研究纤溶酶原激活物抑制剂1（Plasminogen activator inhibitor 1,PAI1）是否通过失巢凋亡抵抗来影响胃癌的侵袭及转移能力,进一步探讨PAI1是否通过能量代谢途径调控胃癌失巢凋亡抵抗。方法:（1）通过生物信息学方法预测PAI1在胃癌中的表达水平,并预测其在胃癌患者中的预后价值;（2）通过免疫组织化学染色半定量的方法检测胃癌组织、癌旁组织和淋巴结中PAI1的表达水
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目的:研究纤溶酶原激活物抑制剂1（Plasminogen activator inhibitor 1,PAI1）是否通过失巢凋亡抵抗来影响胃癌的侵袭及转移能力,进一步探讨PAI1是否通过能量代谢途径调控胃癌失巢凋亡抵抗。方法:（1）通过生物信息学方法预测PAI1在胃癌中的表达水平,并预测其在胃癌患者中的预后价值;（2）通过免疫组织化学染色半定量的方法检测胃癌组织、癌旁组织和淋巴结中PAI1的表达水平及定位情况,同时使用蛋白免疫印迹的方法验证PAI1在3对胃癌组织及其配对癌旁组织中的表达水平,使用卡方检验分析PAI1与胃癌患者临床病理特征之间的关系;并进一步通过Cox回归模型的单变量与多变量分析PAI1能否成为预测胃癌患者预后的独立危险因子;（3）通过流式细胞术检测胃癌细胞在贴壁及悬浮不同状态下的凋亡率;（4）通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹技术检测正常胃粘膜上皮细胞GES-1和4株不同胃癌细胞系中PAI1的mRNA及蛋白表达情况,并检测胃癌细胞在贴壁和悬浮状态下PAI1的表达变化;（5）利用特异性PAI1 shRNA慢病毒下调PAI1的表达。然后利用流式细胞术检测PAI1下调对胃癌细胞贴壁和悬浮24 h两种状态下细胞凋亡率的影响,进一步通过平板克隆形成实验、Transwell侵袭实验及划痕愈合实验检测PAI1表达降低后对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响;（6）使用NOD/SCID小鼠建立胃癌细胞肝转移模型,体内探讨PAI-1表达对胃癌细胞肝转移的影响;（7）通过蛋白免疫印迹和ROS试剂盒探索能量代谢途径中丙酮酸脱氢酶激酶（PDKs）及活性氧簇（ROS）是否是PAI1在胃癌细胞失巢凋亡抵抗中的作用机制。结果:（1）通过生物信息学预测PAI1在胃癌组织中高表达,并且PAI1高表达的患者预后更差;（2）通过组织样本及细胞水平验证PAI1在胃癌组织和细胞中高表达,PAI1高表达的胃癌患者预后差,远处转移和PAI1的表达水平是胃癌患者预后不良的独立危险因子;（3）胃癌细胞较胃粘膜正常上皮细胞,悬浮后更易形成细胞集落,在贴壁状态下胃癌细胞的凋亡率和胃粘膜正常上皮细胞无明显差异,但是悬浮24 h后,胃癌细胞的凋亡率明显低于胃粘膜正常上皮细胞的凋亡率（4）与GES-1相比,PAI1 mRNA和蛋白水平在胃癌细胞MKN-45和AGS中的表达最高,并且悬浮24 h后,PAI1在MKN-45和AGS中的表达水平升高,而在GES-1中无变化;（5）下调PAI1的表达后,在贴壁状态下,与sh-Ctrl组相比,凋亡率无明显变化,在悬浮状态下,凋亡率明显升高,下调PAI1的表达后同时降低了MKN-45和AGS细胞的增殖、侵袭和迁移能力;（6）在胃癌细胞肝转移动物模型中,与sh-Ctrl组相比,sh-PAI1组中肝转移灶的荧光强度显著降低,转移灶的数目明显减少;（7）PAI1通过调控ROS、PDK1/2途径促进胃癌失巢凋亡抵抗。结论:PAI1在胃癌组织和细胞中表达升高,PAI1高表达的患者较低表达的患者预后更差;PAI1的表达是预测胃癌患者不良预后的独立危险因子;PAI1可以促进失巢凋亡抵抗的能力介导胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移;机制方面,PAI1主要调控ROS、PDK1/2途径促进胃癌细胞的恶性生物学行为。因此,PAI1在胃癌的生物学进程中扮演着重要角色,可能是胃癌治疗的潜在靶点。
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