乳腺癌是女性发病率第一位的恶性肿瘤,目前乳腺癌的治疗手段日趋丰富,包括手术治疗、化学治疗、靶向治疗、内分泌治疗以及放射治疗。然而仍有很多患者死于乳腺癌复发转移,其原因可能是对抗癌药物的耐药,因此对寻找乳腺癌新型治疗靶点的需求愈发迫切。NDRG2基因（N-myc downstream regulated gene 2）是NDRG基因家族（N-myc down-stream regulated gene family）中重要的一员,NDRG2基因在乳腺癌中具有抑制生长、诱导凋亡、降低侵袭转移能力等作用,由此可见NDRG2基因是一个具有潜力的抗癌靶点。以往有研究报道敲低NDRG2基因表达可抑制乳腺癌细胞凋亡,据此推测,NDRG2基因过表达可诱导乳腺癌细胞凋亡,而细胞凋亡的原因之一可能是细胞周期阻滞。首先检测NDRG2基因在乳腺癌细胞中过表达对细胞周期的影响,观察到细胞发生了G2期阻滞。通过对可诱导细胞G2期阻滞的信号通路进行筛选,发现NDRG2基因过表达对m TOR/p70S6K信号通路影响最为显著,因此选择此信号通路作为研究对象。本研究对NDRG2基因过表达诱导乳腺癌细胞G2期阻滞的机制进行研究,以期发现其诱导凋亡的分子机制。目的探究NDRG2基因过表达诱导乳腺癌细胞G2期阻滞的机制。方法1.构建NDRG2基因过表达质粒并将其转染入乳腺正常上皮细胞系MCF-10A以及乳腺癌细胞系MCF-7,SK-BR-3,MDA-MB-231中。2.通过Western blot和RT-PCR检测转染过表达质粒后细胞中NDRG2表达水平,验证其过表达。3.通过流式细胞仪对细胞周期进行检测。4.通过Western blot对m TOR/p70S6K信号通路中关键信号分子p-m TOR、p-p70S6k,以及p-c-Jun、p-NF-k B表达水平进行检测。5.通过RT-PCR和荧光素酶报告基因实验对m TOR/p70S6K信号通路、c-Jun下游靶点NF-k B、AP-1、YY-1、Cyclin D1表达水平、转录水平进行检测。结果1.流式细胞仪细胞周期检测结果显示:NDRG2基因过表达可以显著缩短乳腺癌细胞S期并延长G2期,使细胞发生G2期阻滞。2.Western blot结果显示:在乳腺癌细胞系中,NDRG2基因过表达抑制p-m TOR、p-p70S6K、p-NF-k B以及p-c-Jun蛋白的表达。3.荧光素酶报告基因实验结果显示:在乳腺癌细胞系中,NDRG2基因过表达组乳腺癌细胞中NF-k B和AP-1的表达显著低于转染空载质粒对照组。4.RT-PCR结果显示:NDRG2基因过表达使乳腺癌细胞系中Cyclin D1和YY-1的转录水平明显降低。结论NDRG2基因过表达可抑制乳腺癌细胞中m TOR/p70S6K信号通路活性、c-Jun表达,使下游靶点NF-k B、AP-1、YY-1、Cyclin D1表达降低,诱导细胞发生G2期阻滞。