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目的：周围神经损伤是临床上的常见病,其功能恢复的程度直接影响着病
人的生活质量,因此如何促进受损神经的再生与修复一直是临床研究的重要课题。本实验采用SD大鼠,参照Luis的方法设计坐骨神经挤压伤模型,通过对坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)、静止坐骨神经指数(static sciaticindex,SSI)以及坐骨神经干动作电位传导速度(nerve conduction velocity,NCV)的测定,光镜观察有髓神经纤维的数目和形态、雪旺细胞(Schwann cell,SCs)的数目,透视电镜观察有髓神经纤维形态、髓鞘的形态、神经纤维中细胞器的形态及水肿情况以及SCs的凋亡情况,来探讨人组织激肽释放酶(Human TissueKallikrein,HTK)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。旨在为临床治疗提供依据。
方法：取60只重为180～200g的SD大鼠,雌雄各半。随机分成3组:A组为假手术组(正常对照组),雌性SD大鼠10只,雄性SD大鼠10只;B组为人组织激肽释放酶组(HTK组),雌性SD大鼠10只,雄性SD大鼠10只;C组为对照组(坐骨神经挤压伤模型组),雌性SD大鼠10只,雄性SD大鼠10只。用1％戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉后,大鼠俯卧位于操作台上,右侧股部去毛,在无菌操作下暴露右侧坐骨神经。A组只分离坐骨神经不压迫损伤,同时不给予任何药物治疗。B、C两组制成坐骨神经挤压伤模型,所有实验大鼠取右腿,在胭窝以上区域消毒后剪开皮肤,长度为1cm,用止血钳沿肌肉方向钝性分离皮下组织、肌肉。看到神经后,用生理盐水预先湿润的玻璃分针,仔细分离暴露好腘窝以上坐骨神经。取灭菌的预先用生理盐水湿润的止血钳(上海医疗器械集团有限公司手术器械厂生产,12.5cm止血钳),钳夹暴露好的神经段,压力为止血钳上到一齿为止,造成约4mm左右宽度的神经挤压伤,挤压时间为30秒。放开止血钳后,在肉眼下可观察到受损段神经呈透明状。神经复位后缝合创口。待麻醉苏醒后,动物放回饲养笼正常喂养。B组制成坐骨神经挤压伤模型后半小时以及术后每日经尾静脉注射17.5×10-3PNAU/Kg HTK治疗。C组制成坐骨神经挤压伤模型后半小时以及术后每日经尾静脉注射等量的生理盐水。术前do和术后d1,d3,d5,d7,d9,d11,d13每只大鼠均测定SFI和SSI,术后d14每组随机抽取8只雌性SD大鼠、8只雄性SD大鼠测定NCV。术后d14每组随机抽取1只雌性SD大鼠、1只雄性SD大鼠取受损段神经制成石蜡切片、HE染色后光镜观察有髓神经纤维的数目和形态。术后d14每组剩余的1只雌性SD大鼠、1只雄性SD大鼠取受损段神经,电镜观察,透视电镜观察有髓神经纤维形态、髓鞘的形态、神经纤维中细胞器的数目、形态及水肿情况以及SCs的凋亡情况。
结果：
1.坐骨神经功能指数(SFI)、静止坐骨神经指数(SSI)变化术前A、B、C三组的SFI、SSI均在0左右,三组间无统计学差异。在A组中,SFI、SSI值在手术前后未见明显改变,无统计学差异。在B组和C组中,术后d1 SFI、SSI均为-100左右,两组间无统计学差异。以后每天发现B组的SFI、SSI恢复的情况要优于C组,从d3开始两组SFI值有统计学意义(P＜0.05)、从d5开始两组SSI值有统计学意义(P＜0.05)。此情况一直持续到d11,d13时SFI、SSI值在B组与C组之间无统计学意义。
2.坐骨神经干动作电位传导速度(NCV)术后第14天,B组的NCV值要优于C组,两组间有统计学意义(P＜0.05)。A组的NCV值要优于C组,两组间有统计学意义(P＜0.05)。A组与B组间的NCV值无统计学意义。
3.大体组织观察术后第14天,A组大鼠坐骨神经表面光滑,与周围组织无粘连。B组大鼠坐骨神经与周围组织有少许粘连,但不明显。C组大鼠坐骨神经明显充血、水肿、增粗,外膜颜色较红,与周围组织粘连较严重。
4.光镜和电镜结果光镜:术后第14天,A组神经纤维形态规则、排列整齐。B组、C组神经纤维排列紊乱,但B组神经细胞轴突形态较C组更接近于A组。B组SCs数量明显多于C组。电镜:A组神经纤维的髓鞘形态规则,板层清晰,神经纤维内各种细胞器形态止常。B组神经纤维髓鞘再生明显,形态尚规则,板层厚度较A组薄,神经纤维内各种细胞器形态尚止常,线粒体数量增多。C组神经纤维髓鞘水肿、板层分离,甚至髓鞘部分消失,神经纤维内部分细胞器水肿明显,并有大量SCs凋亡。
结论：
1.HTK能增加SFI、SSI、NCV值。
2.HTK能减少SCs凋亡,促进SCs再生。
3.HTK能减少髓鞘溶解。
4.HTK对周围神经系统损伤具有修复作用。