复温速率对冷冻保存血管影响的实验研究

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目的通过对冷冻保存的同种异体血管采用不同的复温速率复温,来比较复温后的血管结构和功能。方法取32段新鲜的兔颈总动脉,放入冻存管中,进行程序降温:在4℃下平衡30 min;从4℃到-40℃,降温速率-1℃/min;从-40℃回温升到-12℃,回温速率10℃/min;从-12℃降温到-40℃,降温速率-1℃/min;从-40℃降温到-100℃,降温速率-10℃/min。然后将血管从降温仪中取出,放入液氮中保存四周。取出后按不同复温速率,分为A组(100℃/min)、B组(30℃/min)、C组(15℃/min)以及未经冷冻的正常组(每组n=8),通过光镜和电镜观察血管结构变化,采用DNA原位末端标记(TUNEL)法比较各组血管壁中细胞的凋亡率。在器官浴槽中通过滴加不同浓度的药物测定不同血管的内皮依赖型舒张功能和非内皮依赖型舒张功能。实验数据处理采用单因素方差分析(SATA7.0统计软件),P<0.05为差异有统计意义。结果在光镜和电镜下观察,A组内皮细胞大片脱落,平滑肌细胞变形,胞浆内可见大量空泡,而B和C组内皮细胞和平滑肌细胞保存较好。正常组的血管壁细胞凋亡率低于A组、B组、C组的细胞凋亡率,差异有统计学差异(P<0.05),A组的细胞凋亡率高于B和C组,差异有统计学差异(P<0.05),而B组的细胞凋亡率高于C组,两组之间并无统计学差异(P>0.05)。血管内皮依赖型舒张功能试验结果示:A、B、C组最大舒张百分比较正常组,分别下降了40%、23%和19%,差异有统计学差异(P<0.05),而A组最大舒张百分比较B、C组下降更多,差异有统计学差异(P<0.05),B、C组之间无统计学差异(P>0.05)。血管非内皮依赖型舒张功能试验结果示:A组最大舒张百分比较正常组下降了29%,较B、C组分别下降了20%和19%,差异有统计学差异(P<0.05)。而B、C组最大舒张百分比与正常组没有明显差异(P>0.05)。结论采用逐步缓慢复温对冷冻保存的同种异体血管的结构和功能有一定的保护作用。
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