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虎杖是我国的传统中药,其中含有丰富的白藜芦醇。白藜芦醇具有多种生物学活性及药理作用。人们已经发现它可以抗癌、抗菌、抗氧化、预防心脏病、降血脂和抗诱变等。目前,白藜芦醇已经凭借其所特有的抗肿瘤活性及对心血管系统的作用,成为食品及医药行业研究的热点。本文对虎杖原料分别采用酶制剂辅助提取法、超声波辅助提取法以及酶法和超声波结合提取法的提取工艺进行了实验研究,并用柱层析法对白藜芦醇粗品纯化,重结晶后得到高纯度白藜芦醇,探索出一项利于环保的绿色提取高纯度白藜芦醇的技术。
1以白藜芦醇为研究对象,采用薄层色谱法进行定性分析,采用高效液相色谱进行定量测定。确定了HPLC检测白藜芦醇含量的色谱条件:Symmetry C-18色谱柱(250×4.6mm,5μm),柱温为室温,流动相为乙睛:水=20:80,流速为1.0mL/min,进样量10μL,测定波长306nm。白藜芦醇在0.6μg/mL-20μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2应用Box-Behnken中心组合进行4因素3水平的实验设计,确定了采用酶法提取白藜芦醇的最佳工艺。纤维素酶提取工艺为:提取时间120min,温度52.5℃,pH为4.5,酶用量2mg/g虎杖。采用复合酶辅助提取虎杖中白藜芦醇的最佳工艺条件为:提取时间120min,温度45℃,pH为5,酶用量为3mg/g虎杖。其中,复合酶提取效果优于纤维素酶提取效果,其平均得率为4.233％。
3确定了酶法提取与超声波辅助提取相结合的提取方法,其工艺条件为:60％甲醇以料液比1:10超声提取30min,挥尽甲醇后加入复合酶量为3-4mg/g虎杖,提取时间120min,温度45℃,pH值为5。相比众多的提取方式,包括纤维素酶辅助提取、复合酶辅助提取、超声波辅助提取以及酶法与超声波的结合提取,从白藜芦醇的得率上来讲,酶法与超声波相结合的提取方式效果最好,平均得率可达4.902％。
4选择AB-8型大孔吸附树脂,对白藜芦醇的粗提液进行了初步的纯化和分离。确定的最佳上样条件为:以30％乙醇作为吸附剂,上样浓度为3-4mL,上样速率为1mL,/min,上样pH为5。确定的最佳解吸条件为:以70％乙醇作为解吸剂,解吸速率1mL,/min,解吸pH为7。
5确定了在乙醇.水结晶体系下白藜芦醇重结晶的工艺条件:以40％乙醇作为结晶溶剂,在4℃下析晶24小时,重复2次,得到的白藜芦醇晶体经高效液相色谱检测,纯度为98.64％,得率为0.133％。