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背景:多重耐药(Multi drug resistance,MDR)也称多药耐药,指细胞原发性和/或对化疗药获得性耐受的能力。MDR的发生机制复杂且多变,有研究证据表明自噬的诱导或抑制存在于多种耐药的细胞中,因此越来越多的研究开始关注自噬对细胞存活和死亡的影响,自噬与MDR的相关性研究也越发深入。miR-199a-5p在肿瘤细胞内表达量的显著性变化也与MDR的发生发展密切相关。虽然许多研究结果显示自噬与miR-199a-5p都具有调节MDR的作用,但肺癌细胞中自噬与miR-199a-5p的变化对MDR的调节作用还尚未有过研究报道。目的:本课题旨在研究MDR肺癌细胞内自噬水平及miR-199a-5p表达水平与MDR肺癌的相关关系。揭示miR-199a-5p对自噬和MDR的作用,探讨miR-199a-5p的直接靶基因,确定miR-199a-5p影响肺癌MDR的可能分子机制。方法:(1)采用Western Blot技术验证肺癌细胞内蛋白的表达情况;(2)采用Neutral Red染色法验证细胞内溶酶体含量的变化;(3)采用RT-q PCR验证肺癌细胞内miR-199a-5p的表达水平及与自噬相关蛋白m RNA的表达水平;(4)采用慢病毒转染分别构建miR-199a-5p敲减及miR-199a-5p过表达细胞模型;(5)采用CCK-8法验证肿瘤药物对细胞的增殖抑制;(6)采用增殖实验和划痕实验验证细胞增殖和迁移的能力;(7)采用Dual-luciferase report实验验证miR-199a-5p的靶基因。结果:(1)紫杉醇(Paclitaxel,PTX)耐药A549/T细胞及H1299/T细胞中自噬水平低,溶酶体含量低,在饥饿和氯喹(Chloroquine,CQ)诱导下产生的溶酶体量低;(2)A549/T细胞中自噬上游负调节信号通路PI3K/Akt/m TOR被激活,自噬相关蛋白ATG5表达量显著降低,导致自噬被抑制;(3)miR-199a-5p在A549/T细胞及H1299/T细胞中过表达;在PTX药物培养刺激下,A549细胞及H1299细胞中miR-199a-5p的表达量表现出浓度和时间梯度依赖性升高的特征;miR-199a-5p的表达水平在多株肺癌细胞中与细胞对PTX的敏感性呈负相关;(4)敲减miR-199a-5p使A549/T细胞对多种肿瘤药物敏感性上升,过表达miR-199a-5p则使A549细胞对多种肿瘤药物敏感性降低;(5)敲减miR-199a-5p可降低PI3K/Akt/m TOR通路蛋白的表达量并促进细胞自噬,过表达miR-199a-5p可激活PI3K/Akt/m TOR通路、降低胞内ATG5蛋白的表达量并抑制自噬;(6)miR-199a-5p可直接靶向自噬受体p62蛋白的CDS序列,在6株肺癌相关细胞中miR-199a-5p的表达水平与p62蛋白的表达量负相关;(7)CQ能诱导细胞MDR水平升高;(8)miR-199a-5p的表达水平变化不影响细胞内ABCB1蛋白的表达量,也不影响细胞增殖和迁移的能力。结论:本课题揭示了miR-199a-5p对肺癌自噬及耐药性的调节作用,首次揭示了miR-199a-5p在MDR肺癌中具有促进自噬负调节信号通路PI3K/Akt/m TOR、下调ATG5蛋白表达量进而抑制自噬的作用,敲减miR-199a-5p能提高MDR肺癌细胞自噬水平并逆转其MDR。首次发现miR-199a-5p直接靶向自噬受体蛋白p62基因。研究结果对研制新的逆转MDR药物提供了新的靶点,为治疗MDR肺癌提供新的见解和理论基础。