羟基红花黄色素A水凝胶的制备及其对急性创伤修复作用的研究

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目的:考察羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对急性创伤的治疗效果,以明胶、壳聚糖为骨架材料,京尼平作为交联剂,制备水凝胶作为HSYA局部给药体系,并探究其对急性创伤愈合的作用。方法:1.通过一系列体外细胞实验,考察HSYA溶液对皮肤急性创伤愈合的促进作用。通过细胞增殖实验考察HSYA对人永生化角质形成细胞(Ha Ca T)、血管内皮细胞(Endo)的增殖,通过细胞划痕实验考察HSYA对Ha Ca T细胞迁移的影响,采用血管形成实验考察HSYA对血管形成的作用。2.建立凝胶中HSYA的HPLC检测方法,测定其精密度、稳定性和加样回收率,采用正交试验构建9组不同处方的的明胶-壳聚糖水凝胶系统,并对水凝胶的干燥失重率、溶胀率、流变学性质及药物释放等性质进行一系列研究,筛选出作为携载HSYA的水凝胶最终处方。3.在体内实验中,考察HSYA明胶-壳聚糖水凝胶的皮肤刺激性。建立大鼠急性皮肤创伤模型,考察HSYA明胶-壳聚糖水凝胶对急性创伤的修复作用。通过伊红-苏木精染色、马森三色染色和血管内皮生长因子(VEGF)免疫组化染色等方法验证HSYA明胶-壳聚糖凝胶的创伤修复效果。结果:1.HSYA对Endo细胞和Ha Ca T细胞增殖有较强的促进作用,对角质细胞迁移有一定促进作用,对血管形成有显著的促进作用。2.成功建立了HSYA的HPLC检测方法;通过正交法制备的9组明胶-壳聚糖水凝胶p H值为6.0-6.5,根据水凝胶的干燥失重率、溶胀率、流变学性质和累积药物释放率,筛选出最终明胶-壳聚糖水凝胶处方为:明胶3%,壳聚糖8%,质量比7:3。该水凝胶具有多孔三维网络结构,携载HSYA后,1h的药物释放率为50%,持续释放作用可维持24h,药物累积释放率达到约70%,具有一定的缓释效果;该水凝胶质地均匀、易于涂布,透气性、吸水性及流变学性质良好。3.HSYA明胶-壳聚糖水凝胶对皮肤不会产生刺激性,能加速皮肤创面伤口的愈合,上调创伤部位VEGF的表达,进而促进皮肤血管新生及部分皮肤附属器官形成,显示出良好的促愈合作用。结论:HSYA明胶-壳聚糖水凝胶可作为良好的局部给药体系,促进急性创伤创面的愈合。
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