【摘 要】
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清道夫受体(SRs)是重要的模式识别受体(PRRs),通过识别病原相关分子模式(PAMPs)在宿主防御病原体中发挥重要作用。B类清道夫受体在虾中已证实具有促进吞噬的功能,基于此,我们
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清道夫受体(SRs)是重要的模式识别受体(PRRs),通过识别病原相关分子模式(PAMPs)在宿主防御病原体中发挥重要作用。B类清道夫受体在虾中已证实具有促进吞噬的功能,基于此,我们探究B类清道夫受体是否在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)中也具有促进吞噬的能力。在本研究中,我们首次从中华绒螯蟹中发现并鉴定了的一种B类清道夫受体(EsSR-B1)。我们鉴定出,EsSR-B1是由包含2726个核苷酸的基因编码的500个氨基酸的蛋白质,具有1503bp的开放阅读框。我们发现EsSR-B1的结构域是进化保守的。通过qRT-PCR分析,EsSR-B1在中华绒螯蟹不同组织中可以广泛检测到,并且在肠和肝胰腺表达最高。经金黄色葡萄球菌或副溶血性弧菌刺激血细胞后,EsSR-B1基因表达量在中华绒螯蟹血细胞中显著上调。通过原核表达技术表达得到EsSR-B1蛋白,并通过亲和层析对蛋白进行纯化,最后复性获得了具有功能的重组EsSR-B1蛋白。重组EsSR-B1蛋白可与细菌广泛结合(包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌),进而引发并促进血细胞被细菌刺激时的吞噬作用。随后,基于在中华绒螯蟹血细胞中的RNA干扰技术,通过免疫荧光实验和流式细胞仪检测吞噬率,我们发现干扰了EsSR-B1基因表达之后,确实血细胞的吞噬能力有所下降。此外,在干扰了EsSR-B1基因的血细胞中,用金黄色葡萄球菌或副溶血性弧菌刺激后,相关抗菌肽基因的表达量降低。本研究不仅发现了EsSR-B1在细菌结合和随后促进血细胞吞噬作用中起到了关键作用,而且为中华绒螯蟹的清道夫受体研究开辟了新的思路,丰富了中华绒螯蟹的先天免疫研究。
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