氧化固醇结合蛋白ORP7与Gate16相互作用调节GS28蛋白稳定性

来源 :暨南大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:ysq2009123
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氧化固醇结合蛋白家族(Oxysterol Bingding Proteins,简称ORPs)是具有氧化固醇结合域的一类蛋白。ORP7是氧化固醇结合蛋白家族中的一员,其功能尚未阐明。在本文研究中,我们构建了人类ORP7基因的诱饵载体,通过酵母双杂交系统筛选Universal Human cDNA Library,发现ORP7与Golgi-associated ATPase enhancer of 16 kDa (Gate16)蛋白能够相互作用。Gate-16具有调节高尔基体蛋白Golgi SNARE of 28 kDa (GS28)稳定性的功能,并且在自吞噬形成中发挥作用。我们通过双分子荧光互补实验进一步证实了ORP7-Gate16在活细胞内的相互作用,酵母双杂交实验进一步证实ORP7的第1-142个氨基酸和Gate16(?)的第30-117个氨基酸是它们发生相互作用的关键区域。在293A细胞中,shRNA介导的ORP7基因沉默使GS28蛋白的含量上升40%,而过表达ORP7得到相反的结果(GS28蛋白水平下降25%)。ORP7对GS28蛋白水平的调节并不是发生在转录水平,而是调节GS28蛋白在蛋白酶体途径中的降解实现的。过表达缺失Gate-16结合结构域的ORP7cDNA未发现GS28水平的变化,证明Gate-16介导了ORP7对GS28的调节。进一步研究发现,ORP7过表达引起反面高尔基体结构的碎裂。ORP7是氧化固醇在细胞内的传感器之一,25-OH同样可以引起GS28通过蛋白酶体途径的降解,并且这种降解是由ORP7介导的。另外,过表达ORP7导致多数细胞内的自吞噬标记蛋白LC3聚集形成泡状结构,Gate-16也存在于ORP7阳性的泡状结构中,提示过表达的ORP7蛋白将Gate-16“捕获”到自噬体内。总之,我们的结果证明ORP7通过与Gate-16的相互作用调节GS28蛋白的稳定性,并且可能介导了氧化固醇25-OH对GS28和高尔基体功能的影响。
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