米氏凯伦藻提取物的溶血作用及细胞毒性研究

来源 :暨南大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:shuishui06
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米氏凯伦藻为世界广布种,能分泌溶血毒素和细胞毒素,危害鱼类和海洋无脊椎动物,已成为我国主要赤潮优势藻种。为明确米氏凯伦藻溶血性和细胞毒性的相关机制,本文分析了米氏凯伦藻溶血毒素的溶血特性;探讨了卵磷脂、鞘磷脂、L-α-磷脂酸、胆固醇和神经节苷脂等五种膜脂及四种单体神经节苷脂对米氏凯伦藻溶血毒素溶血活性的影响;考查了溶血毒素对兔子、SD大鼠和美国红鱼的溶血情况,并用比色法测定了三种动物红细胞膜上神经节苷脂的含量。另外,利用MTT法和光学显微镜观察研究米氏凯伦藻提取物对3株肿瘤细胞增殖的抑制作用;并用免疫荧光染色法分析比较了3株细胞膜上GM1的相对含量。结果显示,米氏凯伦藻粗提物具有很强的溶血活性。加入五种外源性膜脂后,只有神经节苷脂可显著抑制米氏凯伦藻粗提物的溶血活性(P<0.05)。加入神经节苷脂10min后,其溶血活性仅为16.05%,而对照组为35.65%。GM1、GDla、GDlb和GT1b等四种单体脂对毒素的溶血活性均有一定的抑制作用,其中GMl抑制效果最明显(P<0.05)。四种单体神经节苷脂的等量混合物对米氏凯伦藻的溶血活性也有显著的抑制作用(P<0.05)。反应20 min时,毒素的溶血百分数为73.17%,加膜脂的反应体系只有21.35%。随着反应时间的延长,毒素的溶血百分数达到90%以上,而膜脂作用组不到80%。兔红细胞对毒素最为敏感,溶血百分数明显高于相应大鼠(P<0.05)和美国红鱼(P<0.01);兔、大鼠和美国红鱼每克冻干红细胞膜上脂结合唾液酸(LBSA)的量分别为672.08μg/g、585.97μg/g和431.52μg/g,兔红细胞膜上LBSA量显著高于大鼠和美国红鱼(P<0.05)。不同动物红细胞对毒素的敏感性与其红细胞膜上神经节苷脂的量呈明显相关。米氏凯伦藻提取物对几种肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用,表现出明显的细胞毒性。与肝癌细胞Hepg2相比,宫颈癌细胞Hela和肺癌细胞A549对其更为敏感(P<0.01)。肝癌细胞Hepg2、宫颈癌细胞Hela和肺癌细胞A549细胞膜上GM1的相对含量差异不大(P>0.05)。综上,GM1、GDla、GDlb和GT1b等四种单体神经节苷脂及其混合物均可显著抑制米氏凯伦藻提取物的溶血作用,其中GM1的抑制作用最强。不同动物红细胞对毒素的敏感性不同,其与其红细胞膜上神经节苷脂的含量之间存在一定相关性。米氏凯伦藻提取物对Hepg2、Hela和A549等三种肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用,这种作用与细胞膜上GM1的含量无明显相关,提示米氏凯伦藻提取物(溶血毒素)的作用靶点比较复杂。
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