第一部分LIFR基因在肝内胆管细胞癌中的临床意义及相关机制背景白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）是一种具有极强多效性的细胞因子,广泛存在于全身各个系统中。LIF表达于许多恶性肿瘤中,检索TCGA数据库,尤其在胰腺癌、胆管癌中癌组织表达明显高于癌旁。现已有多项研究均表明LIF可促进胰腺癌的发展,并且有作为治疗靶点及生物学标记物的潜力。肝内胆管细胞癌（Intrahepatic Cholangiocarcinoma,ICC）,在肝原发恶性肿瘤中占比约10%,位列第二。ICC起病隐匿,恶性度高,目前手术仍是唯一有效的治疗方式。现有少量研究发现LIF与ICC的生长、侵袭、耐药有关,但其在ICC中的作用尚不明确。本研究旨在通过研究LIFR基因在胆管细胞癌中的作用及其机制,探索LIF/LIFR作为胆管细胞癌新型生物学标记物及治疗靶点的可能性。方法1.采用携带shRNA和LIFR基因的慢病毒载体构建LIFR敲降和过表达稳定细胞系。2.实时荧光定量PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测LIFR基因表达调整前后的LIFR表达情况。3.CCK-8法检测其对肝内胆管癌细胞增殖的影响,克隆形成实验检测其对细胞克隆形成能力的影响。4.Western blot检测与相关分子信号通路和干性相关蛋白的表达。5.利用回顾性收集的ICC手术石蜡标本制作组织芯片,分析LIF/LIFR表达与预后的关系。6.利用公共数据库探索胆管癌细胞中LIF/LIFR的表达与突变及预后的关系。7.利用公共数据库探索LIF/LIFR基因甲基化与表达的关系。结果1.通过慢病毒载体转染shRNA/LIFR基因后,LIFR-mRNA和LIFR蛋白表达水平明显下降/上升。2.LIFR敲降/过表达后,对细胞增殖速率无明显影响。3.LIFR敲降后,对细胞克隆形成能力无显著影响;LIFR过表达可使细胞克隆形成能力增强。4.LIFR过表达后磷酸化STAT3蛋白表达水平上调。5.LIFR敲降/过表达对干性相关蛋白表达水平无明显影响。6.组织芯片和公共数据库中的数据均表明LIF/LIFR不同表达水平的ICC患者预后无统计学差异。7.LIF/LIFR在癌与癌旁的表达水平上有差异。8.LIF/LIFR表达水平与基因甲基化水平呈负相关。结论1.慢病毒载体可有效构建LIFR敲降/过表达稳定细胞系。2.LIF/LIFR可能通过STAT3信号通路对ICC进行调控。3.LIFR表达水平与ICC增殖速度、克隆形成无关。4.LIF/LIFR表达水平差异对ICC预后无显著影响。5.DNA甲基化可能与LIF/LIFR表达变化有关。第二部分肝内胆管细胞癌手术淋巴结清扫的临床预后价值背景淋巴结清扫术（lymph node dissection,LND）在肝内胆管细胞癌（intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC）中具有重要意义。尽管国家综合癌症网络（National Comprehensive Cancer Network,NCCN）指南推荐 ICC 需常规进行 LND,但 LND 的作用仍存在争议。本研究旨在探讨LND对ICC术后生存的影响。方法回顾性分析中国医学科学院肿瘤医院和北京协和医院的232例ICC根治性手术患者。使用逆概率加权法（inverse probability of treatment weighting,,IPTW）平衡组间差异。Kaplan-Meier曲线和Cox比例风险模型用于比较总生存期（OS）和无病生存期（DFS）。结果232例患者中,177例（76.3%）接受了 LND,71例（40.1%）存在淋巴结转移。66例患者（37.3%）切除了 6个及以上的淋巴结。LND不能改善ICC患者的预后。淋巴结转移（LNM）>3的患者可能比LNM 1-3的患者预后更差,特别是在LND≥6的人群中。对于nLND组,接受辅助治疗的患者有更好的OS和DFS。结论LND并不能改善患者的预后。在肿瘤恶性度更高的患者中LND比例更高。LNM数量>3的患者的预后可能比LNM 1-3个的患者的预后差。辅助治疗可能使nLND患者有获益。