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目的: 对IMN患者尿液进行蛋白组学研究,寻找对疾病早期诊断及高凝状态相关的生物学标志物或差异蛋白,为进一步研究提供方向及依据。 方法: 选取沈阳军区总医院肾脏病科2016年6月~2016年10月收治的经肾穿刺活检明确诊断为IMN的11例患者及5例正常人,收集入选者的尿液标本、临床基本资料以及IMN患者的病理学资料。采用蛋白组学技术中的抗体蛋白芯片法对每个样本检测440个因子,根据PLA2R定性、定量、性别、病理分期、24小时尿蛋白定量、肾小球滤过率、病理免疫荧光IgG3、IgG2、IgM等指标对IMN患者组与正常对照组进行分组,筛选差异蛋白,并对差异蛋白做进一步统计学及生物信息学分析。 结果: 1)共纳入11例经肾组织活检,病理诊断为IMN的患者,男6例,女5例,男女比例1.2∶1。平均年龄为(49.45±14.99)岁,肌酐69.39±19.13umol/L,肾小球滤过率为110.62±28.79,其中2例患者诊断为膜性肾病Ⅰ期,7例患者诊断为膜性肾病Ⅱ期,2例患者诊断为膜性肾病Ⅰ~Ⅱ期; 2)每个样本检测440个因子,最终根据不同分组对比IMN患者组与正常对照组,得到显著差异表达蛋白24个,其中有20个蛋白表达上调,分别为4-1BB(肿瘤坏死因子受体超家族成员9)、ALCAM(白细胞活化黏附因子)、Angiostatin(血管生成抑制素)、BDNF(脑源性神经营养因子)、blG-H3、CD163、CD40L、Cripto-1 (畸胎瘤衍生生长因子-1)、DPP IV(丝氨酸蛋白酶4)、FAS L(凋亡相关因子配体)、FOLR1(叶酸结合蛋白-1)、GROa(生长调节致癌基因-a)、ICAM-1(细胞间黏附分子-1)、MBL(甘露糖结合凝集素)、MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)、MCSF R(巨噬细胞集落刺激因子 R)、MIP-1d(巨噬细胞炎性蛋白-1D)、Nidogen-1(巢蛋白-1)、PSA(前列腺特异性抗原)、Siglec-5(唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素5抗体);4个蛋白表达下调,分别为IL-17E(白介素-17e)、LIGHT(轻链蛋白)、SDF-1a(重组人基质细胞衍生因子-1α)、TRAIL R3(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3)。 3)差异蛋白分类,包括血栓凝血相关因子6个、分别为SDF-1a、Angiostatin 、ICAM-1、Nidogen-1、FAS L 、MCP-1;炎症因子9个,分别为MCSF R、SDF-1a、MIP-1d、CD163 、 IL-17E、GROa、blg-H3、FAS L 、TRAIL R3;免疫因子9个,分别为MCSF R、SDF-1a、ICAM-1、MBL、GROa、siglec-5,ALCAM、FAS L 、TRAIL R3;生长因子1个,为Cripto-1;凋亡因子3个,分别为ICAM-1、BDNF 、FAS L;肿瘤坏死因子1个,为TRAIL R3,其中ALCAM、Angiostatin 、CD163 、Cripto-1、DPP IV、FAS L 、ICAM-1、MBL、MCP-1、MCSF R、MIP-1d、Nidogen-1、siglec-5等13个蛋白可以区分IMN患者组与正常对照组,且均呈现高表达状态。P<0.001差异有统计学意义。 4)IMN患者存在高凝状态,相关的血栓、动脉硬化及凝血因子包括SDF-1a、Angiostatin 、ICAM-1、Nidogen-1、FAS L 、MCP-1等。 5)对血栓凝血相关差异蛋白进行pearson 相关性分析:结果发现SDF-1a与eGFR (r=0.208 p=0.539)、白蛋白(r=0.545 p=0.083)呈正相关,与24小时尿蛋白定量(r=-0.284 p=0.398)、血肌酐(r=-0.506 p=0.112)呈负相关;Angiostatin 与白蛋白(r=-0.184 p=0.588)呈负相关,与24小时尿蛋白定量(r=0.523 p=0.099)、血肌酐(r=0.158 p=0.642)、eGFR(r=0.039 p=0.909)呈正相关;ICAM-1与24小时尿蛋白定量(r=0.395 p=0.229)、血肌酐(r=0.139 p=0.683)呈正相关,与eGFR (r=-0.220 p=0.515)、白蛋白(r=-0.264 p=0.434)呈负相关;Nidogen-1与24小时尿蛋白定量(r=0.403 p=0.219)、血肌酐(r=0.178 p=0.600)呈正相关,与白蛋白(r=-0.210 p=0.536)、eGFR(r=-0.178 p=0.600)呈负相关;FAS L与24小时尿蛋白定量(r=0.782 p=0.004)呈明显正相关且p<0.01差异有统计学意义;MCP-1与血肌酐(r=0.633 p=0.037)呈明显正相关,p<0.05差异有统计学意义,与24小时尿蛋白定量(r=-0.111 p=0.745)、eGFR(r=-0.727 p=0.011)、白蛋白(r=-0.224 p=0.507)呈负相关。 结论: A)采用蛋白组学技术中的抗体蛋白芯片法对IMN患者的尿液中蛋白质进行分析,最终得到24个差异表达蛋白; B)IMN患者尿液中有6个蛋白质与血栓凝血相关,分别为SDF-1a、Angiostatin 、ICAM-1、Nidogen-1、FAS L 、MCP-1,且检测结果差异显著,有待于进一步研究其与疾病高凝状态的关系。 C)研究结果发现FAS L 、MCP-1与24小时尿蛋白定量、血肌酐及eGFR关系密切,可能与IMN的发病机制相关。 D)本次实验筛选出的差异蛋白与IMN有很强的相关性,对IMN的生物学标志物的探索提供依据。