硅核量子点微球的制备及其免疫层析应用

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量子点(Quantum dot,QD)作为一种半导体纳米材料,具有量子效率高、吸收光谱宽、发射光谱窄等优点,是生化分析领域良好的候选材料。近年来,将量子点嵌入聚合物分子中构建量子点微球成为研究的热点。与普通量子点相比,量子点微球的荧光信号更强,从而产生了更高的灵敏度和稳定性,现已广泛应用于毒素、病毒、生物标志物等检测。本研究提出了一种高性能硅核量子点微球的制备方法,首先利用聚乙烯亚胺(PEI)的静电吸附作用制备了硅球@量子点颗粒(SiO2@QD);其次利用PEI介导的层层自组装法制备了硅球@多层量子点颗粒;最后利用硅核量子点微球作为标签建立了荧光免疫层析新方法,实现了分析物的快速高灵敏定量检测。主要结论如下:1.通过TEM、SEM、荧光光谱等仪器对硅核量子点微球进行表征。结果表明制备的硅核量子点微球粒径均一、稳定性好、分散性强,与普通量子点相比,荧光信号显著提升。当其作为免疫层析荧光标签时,具有灵敏度高、荧光信号稳定等优点,适用于多通道免疫层析定量检测。2.采用基于双色硅球@量子点(SiO2@QD525、SiO2@QD625)标签的荧光免疫层析法实现了血清中两种炎症标志物C-反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)同时检测。结果表明基于SiO2@QD标签的荧光免疫层析法具有较高的灵敏度、稳定性和特异性,其对CRP和PCT的检测限分别为0.5 ng/m L和0.05 ng/m L,比胶体金免疫层析法分别提高了20和100倍。说明基于SiO2@QD标签的荧光免疫层析方法具有快速、灵敏、定量检测的能力。3.采用基于硅球@双层量子点(SiO2@DQD)标签的荧光免疫层析法检测临床血清中新型冠状病毒(新冠,SARS-Co V-2)特异性Ig M/Ig G抗体,并对其灵敏度、特异性和重复性进行检测。实验结果表明基于SiO2@DQD标签的荧光免疫层析法检测Ig M/Ig G具有优异的稳定性、灵敏度和特异性。4.采用基于硅球@三层量子点(SiO2@TQD)标签的荧光免疫层析法同时检测两种呼吸道病毒甲型流感H1N1(甲流H1N1)和新冠病毒。该方法检测甲流H1N1病毒和新冠重组蛋白的检测限分别为50 pfu/m L和0.005 ng/m L,且具有良好的特异性及稳定性。与商业化ELISA试剂盒相比,检测灵敏度分别提高了100和20倍。说明基于SiO2@TQD标签的荧光免疫层析法具有快速、超敏、定量检测能力。
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