免疫淀粉微球的制备

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肝特异性脂蛋白(liver specific lipoprotein, LSP)在乙型肝炎免疫发病机理中起一定作用,是肝损伤的主要靶抗原。本文将肝特异性脂蛋白抗体(LSP抗体)与淀粉微球交联,制备了免疫淀粉微球,通过LSP抗体与抗原LSP的特异性反应使免疫淀粉微球具有了主动靶向肝脏的功能,保护肝细胞,减少乙肝患者肝损伤,淀粉微球还可载药使药物选择性浓集于病变部位,而不分布或少分布在正常部位,为探索治疗乙型肝炎的新方法提供参考。本研究采用蔗糖密度梯度离心法从小鼠新鲜肝脏中提取LSP,以LSP为抗原免疫新西兰大白兔,制备LSP抗体。以可溶性淀粉为原料,采用反相微乳法合成淀粉微球,利用环氧氯丙烷活化淀粉微球,将LSP抗体与活化的淀粉微球交联,得到免疫淀粉微球。小鼠肝脏冰冻切片的直接荧光抗体染色实验鉴定了所制备的LSP抗体具有特异性。以环氧密度(epoxy density, EPD)为指标,考察了活化过程中的影响因素,研究得出:1.反应初期,活化淀粉微球上环氧密度随着时间的增加和温度的升高而增大;反应进行到一定时间后,活化淀粉微球上环氧密度开始降低,尤其是反应温度较高时,这种降低的趋势更为明显。在30℃下反应5h,可获得最高环氧密度。2.活化淀粉微球的环氧密度随着反应体系中氢氧化钠浓度的增大先增大后减小,当氢氧化钠的浓度为2mol/L时,环氧密度最大。3.在一定范围内,反应体系中环氧氯丙烷的加入量越多,活化淀粉微球的环氧密度越高,当环氧氯丙烷用量为0.35mL/g淀粉微球时,环氧密度达到最大,继续增加环氧氯丙烷的用量环氧密度也不会继续增加。通过单因素实验,优化了LSP抗体与活化淀粉微球交联的条件,适宜交联的缓冲液pH范围为9.4~9.7,交联反应的合适时间为17~20h。在优化条件下,活化淀粉微球与LSP抗体交联,经测定单位淀粉微球交联LSP抗体的量为7.7mg/g。免疫淀粉微球对抗原LSP的结合实验表明:单位免疫淀粉微球对抗原LSP的结合量为0.5mg/g,说明免疫淀粉微球具有了主动靶向性,并且表明与淀粉微球交联的抗体保持了较高的活性,抗体和淀粉微球交联后不影响与抗原的结合。
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