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第一部分京尼平在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中的保护作用 目的：通过体内实验探讨京尼平在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中是否具有保护作用。 方法： 选取成年雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组，n=12)、缺血再灌注模型组（I/R组，n=12)、京尼平预处理组（I/R+GP组,n=12)，建立模型前30分钟给予京尼平50mg/kg灌胃。大鼠麻醉后结扎冠状动脉左前降支缺血30分钟，再灌注2小时后通过TTC染色测定心肌梗死面积变化；通过超声心动图测定左室射血分数（LVEF)、左室收缩末期容积（LVESV)以及左室舒张末期容积（LVEDV)；通过HE染色观察心肌组织病理学变化；使用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡；采集血浆检测肌酸激酶同工酶（CK-MB)、乳酸脱氢酶（LDH)以及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平。收集集心肌组织检测丙二醛(MDA)，活性氧（ROS)以及总超氧化物歧化酶（T-SOD)氧化应激指标。。 结果： (1)与Sham相比，I/R组心肌梗死面积显著增加(P＜0.05)；与I/R组相比，I/R+G P组心肌梗死面积显著缩小(P＜0.05)。 (2)与Sham相比，I/R组LVEF百分比显著降低(P<0.001)， LVESV、LVEDV显著升高(P<0.001)；与I/R组相比，I/R+GP组LVEF显著升高（P<0.001)， LVESV显著降低（P<0.001)、LVEDV显著降低(P＜0.05)。 (3) HE染色发现Sham组心肌组织显示正常的心肌纤维结构，胞核排列规则。与Sham组相比，I/R组大鼠心肌纤维结构紊乱，细胞水肿变性，细胞间隙扩大，胞浆染色不均匀，胞核排列不规则。与I/R组相比，I/R+GP组表现出轻度的心肌结构和形态改变，心肌细胞坏死和心肌间质水肿有所改善。 (4)与 Sham组相比， I/R组大鼠心肌凋亡细胞显著增加(P<0.001)；与I/R组相比，I/R+GP组大鼠心肌凋亡细胞显著降低(P＜0.05)。 (5)与Sham组比较，I/R组血浆CK-MB、LDH水平显著增加(P<0.001)；与I/R组相比，I/R+GP组CK-MB、LDH水平显著降低(P<0.001)。 (6)与Sham相比，I/R明显增加了心肌组织MDA(P<0.001)、ROS(P<0.001)水平，显著降低了心肌组织T-SOD(P<0.001)水平;与I/R组相比，I/R+GP组MDA(P<0.001)、ROS(P<0.001)水平显著降低，T-SOD水平显著升髙(P＜0.05)。 (7)与Sham相比，I/R组显著增加血浆中IL-ip iP<0.000、IL-6(P<0.001)、TNF-a(P<0.001)水平；与I/R组相比，I/R+GP组IL-1β（P＜0.05)、IL-6(P<0.05)、TNF-a(P＜0.05)水平显著降低。 结论：京尼平可缩小/R损伤后心肌梗死面积，保护I/R损伤后左心室功能，并能够改善左心室心肌组织结构和形态改变，减少I/R损伤后心肌细胞凋亡，京尼平抑制I/R损伤后心肌酶和炎症因子的释放，并具有抗氧化作用。 第二部分京尼平通过Nrf2/HO-l通路改善大鼠心肌缺血再灌注损伤 目的：通过体内实验探讨京尼平是否通过Nrf2/H0-1通路改善大鼠缺心肌血再灌注损伤。 方法：建立缺血再灌注模型后，通过免疫组织化学检测心肌组织中Nrf2及H0-1的表达变化。提取心肌组织蛋白通过Western blot检测心肌组织Nrf2、H0-1及Akt表达。 结果： (1)组织化学结果显示：与Sham组相比，I/R组胞浆中Nrf2显著减少，而I/R+GP组中Nrf2蛋白在胞浆中几乎未见表达；而Western blot结果显示：与I/R组相比，I/R+GP组在细胞核蛋白中Nrf2水平显著升髙(P＜0.05)； (2) H0-1组织化学结果显示：I/R损伤后心肌细胞H0-1表达略有增加，而G P的预处理使I/R+GP组心肌细胞H0-1表达较I/R组显著增加；Western blot结果显示：与Sham组相比，I/R组心肌细胞H0-1表达组显著增加(P＜0.05)，与I/R相比，I/R+GP组心肌细胞H0-1表达亦明显增加(P＜0.05)。 (3)与Sham组相比，I/R组磷酸化Akt水平显著增加(P＜0.05)；与I/R组相比，I/R+GP组磷酸化Akt的表达显著增加(P＜0.05)。 结论：京尼平可能通过Nrf2/H0-1通路改善大鼠心肌缺血再灌注损伤。 第三部分京尼平对H9c2细胞缺氧复氧模型的保护机制研究 目的:通过体外实验探讨京尼平对H9c2细胞缺氧复氧模型中Nrf2/H0-1通路的作用以及A kt依赖的保护机制。 方法：建立H9c2心肌细胞H/R模型，分为对照组（Control组）、京尼平组（GP组）、缺氧复氧组（H/R组）、京尼平预处理缺氧复氧组，京尼平剂量为10|jmol/L(H/R+GP组）。使用CCK8试剂盒检测细胞存活率。收集上清及细胞检测H9c2心肌细胞H/R后LDH，MDA, T-SOD的含量。通过加入H0-1抑制剂(Snpp)运用RT-qPCR和Western blot从基因和蛋白水平检测H0-1的表达变化。使用siRNAs细胞转染技术沉默Nrf2，运用免疫荧光技术检测Control、H/R、H/R+GP三组细胞中Nrf2的表达变化;使用Western blot检测Nrf2、H0-l的表达变化。通过加入A kt抑制剂(MK-2206)采用免疫荧光技术和Western blot检测Nrf2、AKT的表达变化。 结果： (1)与Control组相比， GP组的存活率无显著性差异(P＞0.05)’而H/R组的细胞存活率显著降低(P＜0.05)；与H/R组相比, H/R+GP组细胞存活率出现显著增加(P＜0.05)。 (2)与Control组相比，GP组的LDH, T-SOD和MDA的含量无统计学差异(P＞0.05)，而 H/R组LDH和MDA的表达显著增髙(P＜0.05),而T-SOD含量在细胞中显著下降(P＜0.05);与H/R组相比，H/R+GP组细胞中LDH、MDA含量显著下降(P＜0.05)，而T-SOD显著下降(P＜0.05) o (3)与Control组相比，H/R组中H0-1的mRNA与蛋白水平显著增髙（P＜0.05)，H/R+GP组中H0-1的表达进一步增加（P＜0.05)。与H/R+GP组相比，当加入Snpp时，能显著阻断京尼平升高H0-1的作用(P＜0.05)。同时Snpp能显著抑制京尼平对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后的细胞活力和LDH、 T-SOD和M D A表达的影响(P＜0.05)。 (4)与Control组相比， H/R组中Nrf2在胞浆分布减少而细胞核明显增加(P＜0.05)，且 H/R+GP组Nrf2在胞核的分布更为明显(P＜0.05)，但Nrf2蛋白总量不变；当采用siRNA沉默Nrf2后，细胞中H0-1的表达明显降低(P＜0.05)，提示Nrf2转移胞核后可上调H0-1的表达。 (5)免疫荧光检测Nrf2时发现，H/R+GP组中胞浆Nrf2只有很少表达，绝大多数转移至细胞核，当使用Akt抑制剂时，Nrf2由胞浆转移至细胞核的效应显著被抑制。Western blot结果显示，H/R组和H/R+GP组中Akt并未发生显著升髙，但 p-Akt/Akt比例显著增加(P＜0.05)。 结论：京尼平对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后具有一定保护作用；可能通过p-AKT活化Nrf2/H0-1的信号通路来发挥细胞保护作用。