【摘 要】
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目的:探讨SEF作为hi PSC饲养层细胞的可行性,为进一步研究不同饲养层对干细胞特性及应激能力的影响奠定基础。研究地塞米松（DEX）诱导hi PSC氧化应激机制与Nrf2/HO-1和Bax/Bcl-2通路的关系,为探寻多能干细胞在体内或体外抗氧化应激的措施提供依据。方法:从1月龄绵羊胚胎分离培养SEF,经丝裂霉素C处理后作为hi PSC体外培养的饲养层细胞,比较其与SNL饲养层细胞对hi PSC
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31872438）； 山西省重点研发计划项目（201803D221022-4）； 山西省回国留学人员科研资助项目（2016-067）； 山西省留学回国人员科技活动择优资助项目； 山西省平台基地和人才专项优秀人才科技创新项目（2
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目的:探讨SEF作为hi PSC饲养层细胞的可行性,为进一步研究不同饲养层对干细胞特性及应激能力的影响奠定基础。研究地塞米松（DEX）诱导hi PSC氧化应激机制与Nrf2/HO-1和Bax/Bcl-2通路的关系,为探寻多能干细胞在体内或体外抗氧化应激的措施提供依据。方法:从1月龄绵羊胚胎分离培养SEF,经丝裂霉素C处理后作为hi PSC体外培养的饲养层细胞,比较其与SNL饲养层细胞对hi PSC形态及多能性指标的影响。将hi PSC以不同浓度（12.5、25、37.5和50μmol/L）的地塞米松分别处理48 h、72 h,通过形态学观察、AP染色和ROS水平检测分析hi PSC氧化应激的情况,并通过TUNEL、线粒体膜电位和ATP水平检测分析hi PSC凋亡的情况,进一步通过q RT-PCR、免疫细胞化学和Western blotting检测（p-）Nrf2、HO-1、Bax和Bcl-2的表达水平。结果:在试验期内,与SNL饲养层培养的hi PSC相似,SEF饲养层培养的hi PSC能够快速增殖并呈集落样生长,多能性检测指标AP染色同样呈蓝紫色,可以正常表达c-Myc、Klf4、OCT4、SOX2、TRA-1-60和SSEA-4多能性因子。不同浓度DEX处理48和72 h后导致hi PSC出现不同程度的损伤和ROS聚积,其中ROS水平在50μmol/L DEX组最高。DEX处理48 h导致hi PSC的线粒体膜电位和ATP水平明显下降,但TUNEL染色并未发生明显变化。DEX处理hi PSC 48 h时,各处理组HO-1、Nrf2、Bax和Bcl-2 m RNA的表达基本呈现不同程度的上调趋势,其中50μmol/L DEX组差异显著;各处理组HO-1、Nrf2、p-Nrf2、Bax和Bcl-2的蛋白质表达量均有不同程度升高趋势,其中50μmol/L DEX组差异显著。结论:成功分离并制备了SEF饲养层细胞,并初步证实其可用于培养hi PSC。通过地塞米松处理诱导了hi PSC氧化应激,并研究表明其相关机制与Nrf2/HO-1和Bax/Bcl-2通路有关。
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