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目的：分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性，从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势，并尝试从基因突变角度分析T-bet表达降低的可能原因；探讨。P53与T-bet的相关性，了解T-bet与肿瘤转移之间的关系；初步探讨针对这种分化趋势的T-bet参与的胃癌生物治疗的可行性。
方法：采用RT-PCR，Real-time PCR，精确测定55例胃癌患者及45例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3转录因子和IFN-γ、IL-4等细胞因子的水平，应用免疫组化法检测胃癌组织中肿瘤转移的特异性标志P53的表达状况；利用RT-PCR方法，从健康人外周血中分离得到的淋巴细胞mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA，经测序证实后插入PIG(Pzac2.1-IRES-eGFP)质粒，用磷酸钙共沉淀法，与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞，包装成重组的病毒颗粒，获得编码T-bet的重组腺相关病毒。用浓缩的病毒感染体外培养的SGC-7901，荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光蛋白情况，并且用RT-PCR和Western blot方法鉴定T-bet、IFN-γ口在SGC中的表达。采用DHPLC方法检测T-bet外显子上基因的突变点。采用DHPLC及基因测序方法检测T-bet外显子上基因的突变点。
结果：55例胃癌患者T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的表达率依次为51％(28/55)、78％(43/55)、27％(15/55)、69％(38/55)。定量PCR结果显示，病人组的T-bet和IFN-γ明显低于正常对照组(p<0.01)，而GATA3和IL-4则明显高于正常对照组(p<0.01)。T-bet与IFN-γ，在病人体内的mRNA表达存在正相关性(p<0.01)，健康人则否。GATA3与IL-4的表达在两组中均呈明显正相关(p<0.01和p<0.05)，且在P53阳性的患者中，T-bet的表达率较低，而GATA3的表达率较高。获得含有T-bet的重组腺相关病毒，将其感染SGC后，约40％．50％的细胞出现绿色荧光。对被感染细胞进行RT-PCR，扩增出1670bp的T-bet及388bp的IFN-γ目的条带，通过Western blot也检测到被感染的细胞中T-bet及IFN-γ蛋白的表达。DHPLC检测并通过测序发现T-bet的第一外显子的第310位出现(G/C)颠换其检出率为7.5％，第六外显子第550位出现(G/A)转换检出率为1/25％。
结论：胃癌患者有明显Th2漂移现象，且P53的表达与T-bet的表达呈现负相关，说明在胃癌患者体内T-bet表达频率的高低与肿瘤的转移相关。人T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV-T-bet成功地转染了SGC-7901，并检测到转染后细胞分泌IFN-γ，为T-bet基因参与肿瘤的生物治疗奠定了基础。T-be可以作为诊断胃癌的标准以及生物治疗的一个潜在的靶标。