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目的:建立四引物扩增受阻突变体系(tetra-Primer AmplificationRefractory Polymorphism System-Polymerase Chain Reaction,4P-ARMS-PCR)方法学;分析错配修复蛋白基因多态性与少精、无精症的关系,从而为少精、无精症病因研究探索新的途径。方法:1.以错配修复蛋白MLH3基因C2531T多态性为例建立4P-ARMS-PCR方法学。2.4P-ARMS-PCR检测错配修复蛋白MSH4基因G289A多态性。3.4P-ARMS-PCR检测错配修复蛋白MSH4基因A1766G多态性。4.聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析法(Polymerase ChainReaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)检测错配修复蛋白MSH5基因C85T多态性。结果:1.4P-ARMS-PCR检测错配修复蛋白MLH3基因C2531T多态性结果完全符合PCR-RFLP、DNA测序验证结果。2.少精、无精组与正常对照组MLH3 C2531T基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(少精、无精组:x~2=0.012,P＞0.05;正常对照组:x~2=1.430,P＞0.05),所选人群具有代表性。患者和正常对照组MLH3 C2531T的基因型分布存在明显的差异,CT+TT基因型在患者中有明显的流行(x~2=8.695,P＜0.05,OR=1.975,95%CI:1.230～3.173);T等位基因的频率在患者组显著高于正常对照组(x~2=10.631,P＜0.05,OR=2.250,95%CI:1.352～3.744)。3.未检测到错配修复蛋白MSH4基因G289A多态性。4.未检测到错配修复蛋白MSH4基因A1766G多态性。5.少精、无精组与正常对照组MSH5 C85T基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(少精、无精组:x~2=0.113,P＞0.05;正常对照组:x~2=0.626,P＞0.05),所选人群具有代表性。患者和正常对照组MSH5 C85T的基因型分布存在明显的差异,CT+TT基因型在患者中有明显的流行(x~2=11.829,P＜0.05,OR=2.507,95%CI:1.428～4.400);T等位基因的频率在患者组显著高于正常对照组(x~2=14.195,P＜0.05,OR=2.887,95%CI:1.599～5.211)。6.对少精、无精组和正常对照组进行MLH3 C2531T、MSH5 C85T基因多态性的联合分析显示:两基因型在少精、无精组和正常对照组的分布存在明显的差异(x~2=18.181,P＜0.05);同时表达MLH3C2531T(CT+TT)和MSH5 C85T(CT+TT)基因型的个体少精、无精症发病的危险性最大(x~2=15.653,P=0.000,OR=6.775,95%CI:2.117～21.683)。结论:1.4P-ARMS-PCR可快速、简便、准确检测基因单核苷酸突变(singlenucleotide polymorphism,SNP)。2.错配修复蛋白MLH3基因C2531T多态性与少精、无精症存在相关性,其中CT+TT基因型可能是疾病发生的危险因素,T等位基因可能是该疾病的遗传易感基因。3.错配修复蛋白MSH5基因C85T多态性与少精、无精症存在相关性,其中CT+TT基因型可能是疾病发生的危险因素,T等位基因可能是该疾病的遗传易感基因。4.错配修复蛋白MLH3和MSH5可能存在一定的内在相关性,MLH3C2531T、MSH5 C85T两基因多态性相互作用从而导致少精、无精症的发生。