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[目的]通过OR3基因沉默技术阐明DR3分子在肝细胞癌侵袭转移中的作用。通过对DR3信号通路的观察来阐释肝细胞癌侵袭转移的机制。为将OR3作为肝细胞癌治疗的分子靶提供理论依据。[方法]1.用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞株Bel-7402、HepG2、Huh7、 SMMC7721以及正常肝细胞HL-7702中DR3的表达;2.设计合成三条靶向DR3基因的siRNA,应用脂质体瞬时转染肝癌细胞株Bel-7402,用实时荧光定量PCR技术检测转染后DR3mRNA水平表达变化,确定最佳转染条件和干扰序列;3.选择最佳干扰序列沉默Bel-7402细胞中DR3基因的表达,MTT比色法检测各组细胞的增殖活性,流式细胞仪进行凋亡率检测,Transwell实验对细胞侵袭能力的变化进行检测;4.用Western blot法检测凋亡信号通路的相关蛋白水平,探讨沉默DR3基因后细胞凋亡的潜在机制。[结果]1.肝癌细胞株Huh7、SMMC772、HepG2、Bel-7402的DR3mRNA表达明显高于正常肝细胞株HL-7702;2.三条靶向DR3基因的siRNA均可以明显地抑制Bel-7402细胞中DR3基因在核酸水平的表达,而AF02670.1stealth883和cocktail的抑制效率最高,两者转染后48小时及72小时在mRNA水平DR3的抑制率分别为89.46%、92.75%和90.53%、94.25%(P<0.01)。3.应用siRNA沉默DR3表达后,对肝癌细胞的增殖具有明显抑制作用。同时可诱导肝癌细胞凋亡,以晚期凋亡为主,而肝癌细胞侵袭力亦受到明显抑制。4.有效沉默DR3基因后,肝癌细胞Bel-7402中NF-kB、P53水平显著降低;而Fas、caspase3、caspase8水平明显升高,DR3配体Apo-3L (TWEAK)表达未见明显变化。[结论]1.DR3分子在肝癌细胞中表达水平明显高于正常细胞。2.有效沉默DR3分子后,可明显抑制肝癌细胞的增殖及侵袭等生物学活动。3.DR3分子被沉默后,其配体数未见明显减少,故其促凋亡作用可能存在其它途径。4.DR3分子可作为肝癌基因治疗的靶标分子进行进一步研究。