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研究目的:银屑病是一种遗传与环境共同作用诱发、免疫介导的重大难治性自身免疫性疾病。近年多项研究已证实IL-23/Th17免疫轴是银屑病炎症的驱动因素和其发病机制的核心。基于此,本研究拟在血热型银屑病患者、银屑病小鼠模型和Th17体外分化模型,从Th17细胞因子分泌、转录因子的表达等方面,阐明加味净屑饮调控IL-23/Th17免疫炎症轴介导抗银屑病的免疫学机制,为加味净屑饮临床应用于银屑病治疗提供科学基础。研究方法:第一部分中医药治疗银屑病理论研究进展从中医药治疗银屑病的临床研究和中医药调控银屑病IL-23/Th-17免疫炎症轴的研究进展两个方面总结中医药对银屑病临床治疗及最新研究进展,为中医药治疗银屑病提供理论参考。第二部分加味净屑饮对银屑病患者治疗效应及Th17调控机制的研究纳入74例血热型银屑病患者,治疗组和对照组各37例,分别给予加味净屑饮和消银颗粒口服治疗,均以8周为疗程,以治疗前后PASI评分和DLQI评分的改善程度评价两组临床疗效;流式细胞法检测治疗前后血清细胞因子IL-17、IL-6、TNF-α、IL-2水平,评价加味净屑饮对患者治疗前后免疫相关的细胞因子的影响。R-qPCR检测治疗前后外周血单核细胞(PBMC)Th17细胞相关基因(IL-17A、RORyt和CCR6)mRNA表达,揭示加味净屑饮药物对银屑病患者Th17细胞调控机制。第三部分加味净屑饮合剂的制备工艺及质量标准研究采用TLC(薄层色谱)对白鲜皮、苦参和黄芩进行定性鉴别,依据《云南省医疗机构制剂研究技术指导原则(中药、民族药)(试行)》对其进行分析方法验证及重现性考察。采用HPLC(高效液相色谱)对合剂中黄柏酮进行定量分析,同时进行相关的方法学考察。第四部分加味净屑饮对银屑病模型小鼠IL-23/Th17免疫炎症轴干预机制的研究构建动物模型,采用咪喹莫特诱导银屑病样皮肤小鼠模型,随机分为模型组、阳性药物组及加味净屑饮低剂量组(8g/kg)、加味净屑饮中剂量组(16g/kg)、加味净屑饮高剂量组(32g/kg)组,HE染色检测皮肤病灶组织病理损伤程度;免疫组化染色观察皮肤病灶组织CD11b+炎症细胞和CD4+T细胞浸润程度;流式细胞术检测脾淋巴细胞表面标志;流式细胞术检测脾淋巴细胞中Th17细胞(CD4+IL-17+)、Th1细胞(CD4+IFN-γ+)和Treg细胞(CD4+Foxp3+)的表达;R-qPCR 检测 Th17 细胞相关基因(IL-17A、IL-17F、IL-23、TNF-α、IL-1β、IFN-γ、RORγt 和 CCR6)mRNA 的表达差异。第五部分加味净屑饮含药血清对Th17细胞体外分化调控作用的研究采用免疫磁珠法分离CD4+T细胞,分别在不同细胞亚群分化诱导剂存在条件下,诱导产生Th17细胞、Th1细胞和Treg细胞。分别用不同浓度和剂量的加味净屑饮含药血清进行分组干预。采用流式细胞术分析Th17细胞(CD4+IL-17A+)、Th1细胞(CD4+IFN-γ+)和Treg细胞(CD4+Foxp3+)比例;ELISA法测定各组培养上清液中的IL-17浓度。研究结果:1.两组有效率比较,治疗组总有效率为73.0%,明显高于对照组(P<0.05);两组治疗后PASI评分和DLQI评分均低于治疗前(P<0.05),治疗组治疗后PASI评分和DLQI评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后IL-17、IL-6、TNF-α、IL-2细胞因子水平低于治疗前(P<0.05);治疗后IL-17AmRNA,CCR6mRNA的表达低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),RORytmRNA表达低于治疗前,但差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组2例于治疗过程中出现轻微腹泻,治疗组和对照组均未出现其他不良反应。2.白鲜皮、苦参和黄芩的TLC鉴别色谱中,供试品与对照药材相应位置上均显相同颜色的特征斑点,阴性无干扰,且分析方法验证及重现性考察均合格。黄柏酮在0.32~4.85m g/ml之间,峰面积与进样量呈良好线性关系,其回归方程为Y=390.91X-7.78(R2=0.9998),准确度实验中,平均加样回收率为96.93%,RSD为1.80%,其余方法学考察均合格,黄柏酮平均含量为39.22μg/ml。3.加味净屑饮中剂量组药物干预显著降低银屑病样模型小鼠皮肤厚度(P<0.01),加味净屑饮中高剂量干预减少CD11b+细胞和CD4+T细胞向皮肤病灶部位浸润;对小鼠脾脏淋巴细胞亚群进行分析显示,加味净屑饮中剂量药物干预,显著下调B220细胞比例(P<0.05),对脾淋巴细胞总CD3+T细胞和CD4+ T细胞比例无明显影响;胞内染色结果显示,与模型组比较,加味净屑饮中剂量降低小鼠脾组织Th17(CD4+IL-17A+)细胞比例,差异具有统计学意义(P<0.05),但是对Th1(CD4+IFN-γ+)细胞和Treg(CD4+Foxp3+)细胞表达无明显影响(P>0.05);加味净屑饮中剂量药物干预显著下调小鼠皮肤组织IL-17A、IL-17F、RORγt、IL-1β、IFN-γ和TNF-αmRNA的表达水平,但加味净屑饮中剂量组及高剂量组对CCR6mRNA和IL-23mRNA的表达水平无明显影响。4.5%加味净屑饮低剂量含药血清组Th17细胞比例低于5%生理盐水含药血清组(P<0.05);与10%生理盐水含药血清组比较,10%加味净屑饮高剂量含药血清组干预后,IL-17产生显著下降,差异具有统计学差异(P<0.05)。加味净屑饮含药血清各组对Th1和Treg细胞体外分化无显著影响(P>0.05)。结论:1.加味净屑饮对血热型银屑病患者有显著疗效,能有效地降低PASI评分和DLQI评分,副作用较小;2.加味净屑饮对银屑病模型小鼠具有显著的治疗效应,其作用机制可能与抑制Th17细胞分化及相关的活化通路有关;3.加味净屑饮可以抑制Th17细胞体外分化,但对Th1和Treg细胞体外分化无显著影响。该研究为加味净屑饮临床应用于治疗血热证寻常型银屑病提供科学依据,丰富和发展中医治疗“白疕”的科学内涵。