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目的1.通过临床研究探讨仙方活命饮治疗弱精子症热毒瘀滞型患者的有临床疗效及安全性;2.观察仙方活命饮对弱精子症小鼠精子活力、精子密度、睾丸组织荧光染色、Nrf2/HO-1信号通路相关基因及蛋白表达变化情况的影响,明确解毒养精法应用仙方活命饮提升弱精子症精子质量的效应机制。方法1.临床研究从江西中医药大学附属生殖医院（南昌市生殖医院）门诊收集弱精子症患者,选取符合本研究诊断标准、纳入标准的弱精子症患者72例。运用SAS软件随机分配至治疗组和对照组,两组各36例,所有病例均签署知情同意书。对照组:服用左卡尼汀口服液（每支10ml,每次1支,每日3次）及维生素E胶囊（每粒0.1g,每次1粒,每日2次）。治疗组:服用仙方活命饮（水煎剂,每次150mL,每日2次）联合西药（见对照组）。两组治疗时间均为3个月,观察治疗前后中医症状评分、精子密度、前向运动（PR）精子、前向运动+非前向运动（PR+NP）精子、精子DNA碎片指数（DFI）等各项观察指标的变化情况。2.实验研究选取30只正常BALB/c小鼠（雄性8周）,根据小鼠体重排序编号,运用SAS软件采取随机法分为6组,A组:空白对照组;B组:模型组;C组:仙方活命饮（中药）低剂量组;D组:仙方活命饮（中药）中剂量组;E组:仙方活命饮（中药）高剂量组;F组:左卡尼汀口服液+维生素E胶囊（西药）组。B-F组小鼠每周腹腔注射一次甲氨蝶呤,按0.5mg/kg标准注射,共注射8周,A组注射等量生理盐水,共注射8周。从第9周开始各组分别进行药物治疗,A、B组:生理盐水0.11ml/d,C-E组:7.13g/kg/d、14.26g/kg/d、28.52g/kg/d仙方活命饮,F组:左卡尼汀+维生素E（30:1）0.55g/kg/d。各组共治疗4周。12周内各组小鼠均无死亡情况,所有小鼠参与后续分析。采用颈椎脱臼法处死各组小鼠,眼球取血法收集血液,血液进行静置后于低温高速离心机（4000r/min）离心20min,将上清液低温（-20℃）冷藏。打开小鼠腹腔后对睾丸和附睾组织进行分离,并用生理盐水冲洗干净,除去血液和水分后观察精子活力、精子密度、睾丸组织荧光染色、血清ROS水平、Nrf2/HO-1信号通路相关基因及蛋白表达情况。结果1.临床研究1.1两组患者年龄比较两组患者年龄比较,无统计学差异（P＞0.05）。1.2两组患者病程比较两组患者病程比较,无统计学差异（P＞0.05）。1.3两者患者精液量比较两组患者治疗前精液量比较,无统计学差异（P＞0.05）;两组患者治疗后精液量比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗组患者治疗前后精液量比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;对照组患者治疗前后精液量比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。1.4两组患者精子密度比较两组患者治疗前精子密度比较,无统计学差异（P＞0.05）;两组患者治疗后精子密度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗组患者治疗前后精子密度比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;对照组患者治疗前后精子密度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。1.5两组患者PR级精子比较两组患者治疗前PR级精子比较,无统计学差异（P＞0.05）;两组患者治疗后PR级精子比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。治疗组患者治疗前后PR级精子比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;对照组患者治疗前后PR级精子比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。1.6两组患者PR+NP级精子比较两组患者治疗前PR+NP级精子比较,无统计学差异（P＞0.05）;两组患者治疗后PR+NP级精子比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。治疗组患者治疗前后PR+NP级精子比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;对照组患者治疗前后PR+NP级精子比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。1.7两组患者精子DFI 比较两组患者治疗前精子DFI 比较,无统计学差异（P＞0.05）;两组患者治疗后精子DFI 比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。治疗组患者治疗前后精子DFI比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;对照组患者治疗前后精子DFI比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。1.8两组患者中医症状积分比较两组患者治疗前中医症状积分比较,无统计学差异（P＞0.05）;两组患者治疗后中医症状积分比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。治疗组患者治疗前后中医症状积分比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;对照组患者治疗前后中医症状积分比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。1.9临床疗效对比治疗组总有效率为88.89%,对照组总有效率为75.00%;经非参数检验,两组总有效率比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。1.10安全性观察在治疗过程中,治疗组和对照组尿常规、血常规及肝肾功能等检查均正常,两组药物安全。2.实验研究2.1仙方活命饮对小鼠精子活力的影响与空白对照组精子活力比较,模型组精子活力明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。中药低剂量组、中剂量组、高剂量组及西药组小鼠精子活力与模型组比较明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。2.2仙方活命饮对小鼠精子密度的影响与空白对照组精子密度比较,模型组精子密度明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。中药低剂量组精子密度、中剂量组、高剂量组精子密度与模型组比较明显升高,,差异均有统计学意义（P＜0.01）;西药组精子密度小鼠精子密度与模型组比较明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与西药组比较,中药各组对精子密度改善明显,差异均有统计学意义（P＜0.01）。2.3仙方活命饮对小鼠睾丸组织ROS水平影响采用DHE染色与血清含量测定评估睾丸组织ROS水平,其中模型组与对照组比较,活性氧水平明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;中药各组、西药组与模型组比较,活性氧水平明显降低,差异无统计学意义（P＜0.01）;中药各组与西药组比较,活性氧水平无明显改善,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.4仙方活命饮对睾丸组织Nrf2 mRNA表达影响与对照组比较,模型组Nrf2 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较,中药低剂量组与西药组Nrf2 mRNA表达均明显改善,差异有统计学意义（P＜0.05）,中药中剂量组、高剂量组Nrf2 mRNA表达显著改善,差异有统计学意义（P＜0.01）。与西药组比较,仅中药高剂量组Nrf2 mRNA表达明显改善,差异有统计学意义（P＜0.05）,中药低剂量组、中剂量组与西药组Nrf2 mRNA表达无明显改善,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.5仙方活命饮对睾丸组织HO-1 mRNA表达影响与对照组对比,模型组HO-1 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较,中药低剂量组与西药组HO-1 mRNA表达无明显改善,差异无统计学意义（P＞0.05）;中药中剂量组HO-1 mRNA表达有部分改善,差异有统计学意义（P＜0.05）;中药高剂量组HO-1 mRNA表达改善显著,差异有统计学意义（P＜0.01）。与西药组比较,仅中药高剂量组HO-1 mRNA表达明显改善,差异有统计学意义（P＜0.05）;中药低剂量组、中剂量组与HO-1 mRNA表达无明显改善,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.6仙方活命饮对睾丸组织Nrf2、HO-1蛋白表达影响2.6.1仙方活命饮对睾丸组织Nrf2蛋白表达影响与对照组比较,模型组Nrf2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较,中药各组Nrf2蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;西药组Nrf2蛋白表达均明显升高（,差异有统计学意义P＜0.05）。与西药组比较,中药各组Nrf2蛋白表达无明显改善,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.6.2仙方活命饮对睾丸组织HO-1蛋白表达影响与对照组比较,模型组HO-1蛋白表达显著降低（,差异有统计学意义P＜0.01）。与模型组比较,中药各组与西药组中HO-1蛋白表达均明显升高（,差异有统计学意义P＜0.01）。与西药组比较,中药组中剂量组、高剂量组HO-1蛋白表达无明显改善,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论1仙方活命饮治疗可以改善热毒瘀滞型弱精子症的中医相关症状,改善精液相关参数指标,且无不良事件发生。表明解毒养精法治疗弱精子症安全有效。2氧化应激可诱导弱精子症的发生,仙方活命饮具有改善睾丸组织氧化应激水平及精子质量的作用,Nrf2/HO-1通路为仙方活命饮治疗作用机制之一。