第一部分:南京性病门诊男性尿道炎患者生殖支原体感染现状及基因分型研究目的:了解2018年1月至2019年12月我院性病门诊男性尿道炎患者生殖支原体(Mycoplasma genitalium,MG)感染情况,并进行基因分型,分析MG感染的分子流行病学特征。方法:收集2018年1月至2019年12月在我院性病门诊就诊的男性尿道炎患者尿液样本,扩增mgpB基因验证MG感染。并对MG阳性样本进行mgpB-SNP分型、MG309-STR分型和mgpB-SNP联合MG309-STR分型,构建系统进化树。结果:收集到尿液样本652例,生殖支原体、淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的感染率分别为11.3%(74/652),50%(326/652)和28.4%(185/652)。MG感染占非淋菌性尿道炎和非衣原体非淋菌性尿道炎患者的18.7%(61/326)和25.6%(50/195)。在74例MG阳性样本中,62例成功扩增出MG309基因。对这62例样本进行基因分型,获得25个不同的mgpB-SNP基因型别,17个为新发现的型别,分辨率系数为0.898。NJ01型所占比例最高,为25.8%(16/62)。共鉴定出11种mgpB-SNP基因型别,重复次数为11的型别样本数最多,占25.8%(16/62),分辨率系数为0.858。mgpB-SNP联合MG309-STR分型分辨率系数最高,为0.987。结论:生殖支原体是南京性病门诊男性尿道炎的重要病原体,基因型别具有较高多样性,mgpB-SNP分型的NJ01型仍然是优势型别。mgpB-SNP联合MG309-STR分型方法分辨能力强。第二部分 2018-2019年南京性病门诊生殖支原体大环内酯和喹诺酮耐药性研究目的:了解我院性病门诊2018年至2019年收集到的男性尿道炎患者生殖支原体阳性尿液样本中,与大环内酯和喹诺酮类药物耐药相关的基因突变现状。方法:收集我院性病门诊2018年1月至2019年12月MG阳性男性尿道炎患者的尿液样本,对大环内酯类耐药相关的23S rRNA及喹诺酮类耐药相关的parC、gyrA、gyrB基因进行巢式PCR扩增和Sanger测序分析。结果:收集了 74份MG阳性男性尿道炎患者的样本。23S rRNA、parC、gyrA、gyrB基因的成功扩增率分别为 94.6%(70/74),93.2%(69/74),90.5%(67/74),91.9%(68/74)。23S rRNA 基因突变率为 91.4%(95%CI:84.83%-97.97%),parC、gyrA、gyrB基因的突变率分别为 84.1%(95%CI:75.47%-92.73%),16.4%(95%CI:7.53%-25.27%)和 2.9%(95%CI:0-6.89%)。23S rRNA 基因最常见的突变类型是 A2059G(44/64,68.8%)。样本数最多的ParC基因突变类型为G248T(40/58,69.0%;导致S83I氨基酸改变),同时发现一例样本具有G248T和T250C双位点突变。GyrA基因主要的突变模式为G285T(4/11,36.4%;导致M95I氨基酸改变)。GyrB基因的突变模式均为G1391A(2/2,100%;导致R464S氨基酸改变)。在所有MG感染者中,同时扩增出23S rRNA、parC、gyrA基因60例,野生型占3.3%(2/60),同时存在23S rRNA和parC基因突变者占83.3%(50/60),23S rRNA、parC、gyrA基因均发生突变者占15.0%(9/60)。结论:南京性病门诊男性尿道炎患者中生殖支原体大环内酯类和喹诺酮类耐药相关的23S rRNA和parC基因突变率维持着较高水平,提示常规检测及持续监测生殖支原体耐药性十分必要。第三部分米诺环素长疗程治疗难治性生殖支原体感染的个案研究目的:观察米诺环素长疗程方案在难治性生殖支原体感染中的疗效。方法:本研究收集了 1例MG 阳性的多药治疗失败的难治性非淋菌性尿道炎男性患者。使用米诺环素0.1g,每天服用2次共28天。在治疗结束后继续随访2次进行判愈试验及症状评估,同时对患者的尿液样本提取DNA,进行23S rRNA,parC,gyrA和16S rRNA基因突变的检测。结果:患者经过治疗后的两次随访,MG检测均为阴性,且尿道不适症状完全消失。患者尿液样本中检测到大环内酯类耐药相关的23S rRNA基因V区的突变(A2059G),同时,与氟喹诺酮类耐药相关的parC基因上发生了 G248T突变(氨基酸改变:Ser83→Ile)。未检测到gyrA基因及16S rRNA基因的突变。结论:米诺环素长疗程方案可成功治愈难治性MG感染,但其具体疗程、疗效及安全性仍需进一步扩大样本量及更多的对照研究。