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目的从基于miR-182-5p表达水平对EMT靶基因的mRNA转录后调控角度探讨软坚散结方防治肺癌术后复发转移作用的分子机制;进一步阐释软坚散结方通过调控miR-182-5p表达影响EMT从而以防止肺癌复发转移的作用机制。方法（1）软坚散结方（RJSJ）抑制肺癌术后复发转移的体内研究。建立裸小鼠人非小细胞肺癌NCI-H460皮下移植瘤术后转移模型,经软坚散结方干预后,采用Log-Rank生存分析法以及寿命表法,分析对术后无病生存时间的影响。采用q-RT-PCR检测let-7a、miR-21、miR-34、miR-200c、miR-182-5p、miR-18a、miR-106b、miR-155、miR-7641,此9个microRNA分子在肺转移瘤中表达量。（2）miR-182-5p对肺腺癌患者术后复发转移的预后影响及靶基因的预测分析。利用美国国家癌症研究所（NCI）建立的TCGA（癌症基因组数据集）数据库,采用ROC曲线、生存分析方法,明确其表达的变化与肺腺癌临床预后的关系;通过GO分析以及miRNA-mRNA互作网络预测,预测其作用的生物学环节及靶基因。（3）miR-182-5p调控肺癌细胞侵袭转移的作用研究。运用荧光定量PCR技术检测不同转移潜能NSCLC细胞株（A549、H460、95-D、H1975等）、HBE（肺支气管上皮细胞）之间miR-182-5p表达差异。将miR-182-5p mimics转染至肺癌细胞株,检测转染后的肺癌细胞株迁移、侵袭能力变化。（4）软坚散结方抗肺癌侵袭转移的作用研究。采用CCK8法检测软坚散结方对H1975、H460肺癌细胞的增殖的影响、流式细胞术检测细胞周期的影响、Transwell和划痕愈伤实验检测对细胞侵袭、迁移行为的影响。q-RT-PCR检测软坚散结方对转移EMT过程中转录因子Twist、Snail,EMT上游产物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和下游产物MMP-2、MMP-9的mRNA的表达的影响。（5）软坚散结方下调miR-182-5p抗肺癌转移的机制。q-RT-PCR检测软坚散结方对miR-182-5p表达的影响;Western blot检测miR-182-5p mimics转染肺癌细胞株中EMT相关蛋白的表达以及靶基因EPAS1的表达。结果（1）体内研究证实,NS组中位无病生存时间为28.0±6.06天,RJSJ组中位无病生存时间为35.0±4.78天（P=0.016）;Cox分析显示,RJSJ可以降低复发转移风险是0.4848倍（HR 0.4498,95%CI为0.2066-1.138）。发现在术后第7、14、21、28、35、42、49天时,RJSJ组无复发转移率为100%、93%、86%、86%、50%、21%及14%,与NS组无复发转移率75%、58%、58%、50%、8%、0%及0%比较,具有统计学差异（P=0.008）。两肺肺转移瘤的个数中,NS组为6.17±2.60个明显低于与RJSJ组3.00±0.58个,RJSJ方的肺转移抑制率为51.38%,两组经统计学检验,有统计学差异（P=0.0049）。q-RT-PCR显示,RJSJ可明显调节miR-182-5p、miR-18a的表达量,与术前和NS组比较均有统计学差异（P＜0.05）。（2）TCGA数据库生物信息学研究显示:513例肺腺癌患者中,miR-182-5p低表达组396例,出现复发转移33.84%,中位复发转移时间（Median disease-free-time,m-DFS）1447天;miR-182-5p高表达组117例,出现复发转移42.73%,其m-DFS为921天,两组风险比（Hazard Ratio,HR）为0.7125,其95%CI为0.4997-1.016,经Log-Rank比较,P=0.0394。经Cox单变量回归分析及多变量回归分析后,发现T分期中T3+T4的复发转移风险是T1+T2的1.881倍,95%CI为1.254-2.823,是预后的影响因素（r=0.0.632,P＜0.05）。miR-182-5p低表达肺癌人群的复发转移风险是miR-182-5p高表达肺癌人群的0.691倍,95%CI为1.058-2.049,表明miR-182-5p表达成为影响的独立预后因素（r=0.369,P＜0.05）。（3）生物信息学分析miRNA-mRNA互作网络,根据累积加权得分,确定了miR-182-5p的其中1个靶标EPAS1,在对513个肺腺癌患者样本的数据分析EPAS1的表达与miR-182-5p表达负相关（r=-0.146,P=0.000934）;q-RT-PCR分析表明miR-182-5p降低可增加EPAS1 mRNA表达水平。（4）miR-182-5p在肺癌细胞中呈特异性高表达;miR-182-5p的表达水平增高,可以促进肺癌细胞侵袭和转移。（5）软坚散结方可以抑制肺癌细胞的生长活性,不仅可以抑制细胞增殖能力,促使细胞停留在G1/G0期,阻滞细胞进入S期,而且可以抑制肺癌细胞侵袭迁移行为。软坚散结方对于肺癌转移相关的EMT调控主要与抑制Vimentin、MMP-2、MMP-9、Snail、Twist基因mRNA的表达有关。（6）q-RT-PCR检测显示,软坚散结方可以下调miR-182-5p的表达;Western-blot检测显示软坚散结方可以上调EMT相关的上皮标志物E-cadherin的表达,降低间质标志物N-cadherin、Vimentin、细胞外基质标记物MMP2及MMP9和转录因子Twist、Snail蛋白表达的水平;采用拯救实验发现过表达miR-182-5p后,软坚散结方可以下调由过表达miR-182-5p诱导的EMT进程调控的相关基因N-cadherin、MMP2、MMP9、Snail、Twist蛋白水平及上调E-cadherin蛋白水平,结果说明软坚散结方通过调控miR-182-5p抑制肺癌的EMT。结论（1）本文通过“从痰论治”肺癌术后复发转移的中医理论,证实具有“消痰软坚散结法”的软坚散结方,可以抑制肺癌细胞的生长、侵袭及迁移,具有抑制肺癌术后复发转移的作用。（2）miR-182-5p在肺癌表达异常增高,软坚散结方可下调肺癌miR-182-5p的表达,分析miRNA-mRNA互作网络,发现EPAS1是miR-182-5p可能的靶基因之一,软坚散结方可能通过下调miR-182-5p,上调EPAS1基因影响EMT从而抑制肺癌细胞侵袭、迁移的作用。