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卵母细胞发育是哺乳动物生殖过程的重要环节之一,其包括了卵母细胞发生、发育与成熟等阶段。由于这些发育过程是在体内进行和完成的,所以限制了研究的深入。本研究借助卵母细胞发育和成熟的体外动态模型,主要针对卵母细胞早期发育和成熟两个关键阶段进行了相关调节机制的研究。 在卵母细胞早期发育阶段,会经历雌性生殖细胞 Nest解聚和原始卵泡形成过程。本研究利用小鼠卵泡体外发生模型,分析了BPA和DEHP对原始卵泡形成的影响。结果发现,添加10μM或100μM的BPA和DEHP导致体外培养的小鼠卵巢生殖细胞Nest解聚和原始卵泡形成显著减少;BPA和DEHP会增加TUNEL阳性的卵母细胞比例,并促进凋亡基因Bax的表达;另外,还抑制了卵泡形成相关基因Lhx8、Figlα、Sohlh2和Nobox的表达;其中,BPA和DEHP还引起卵母细胞Lhx8基因调控区CpG位点的高甲基化。将添加BPA和DEHP培养后的小鼠卵巢移植到免疫缺陷鼠的肾包囊下继续发育,经检测发现卵泡发生受到的损害难以恢复。综上所述,添加BPA和DEHP影响小鼠原始卵泡的体外形成。 卵母细胞成熟的主要体现之一是减数分裂恢复。本研究在小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中对Nuf2的表达和定位进行了分析。通过Myc-Nuf2 mRNA注射和免疫荧光染色发现,卵母细胞中的Nuf2在GVBD到MI时期定位在着丝粒,在ATI时期从着丝粒上消失,MII期又在着丝粒上出现。在卵母细胞中过表达Nuf2可导致纺锤体形态异常、染色体排列紊乱,并激活纺锤体检验点,从而抑制了染色体的分离和中后期的转换。相反,在卵母细胞中抑制 Nuf2基因的表达,会引起第一极体提前排放、纺锤体形态异常和染色体排列不整齐,进而导致非整倍体的产生。综上所述,Nuf2参与调节小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程。