【摘 要】
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目的:探讨以细菌胞浆内包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体(6B11scFv)的复性、纯化及其活性.方法:重组质粒pL-6B11scFv转化大肠杆菌pop2136,温度诱导,以包涵体形式
【机 构】
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北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心,北京,100034中国科学院遗传学研究所;
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目的:探讨以细菌胞浆内包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体(6B11scFv)的复性、纯化及其活性.方法:重组质粒pL-6B11scFv转化大肠杆菌pop2136,温度诱导,以包涵体形式获高效表达.超声破碎细菌细胞得包涵体,用8mol*L-1尿素溶解包涵体后直接稀释复性,探讨复性条件并采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析纯化复性蛋白,SDS-PAGE分析蛋白纯度,Western blot、ELISA及竞争抑制ELISA测活性.结果:复性蛋白质经纯化,纯度达95%以上.当氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度为5mmol*L-1,还原型谷胱甘肽(GSH)浓度为0.5mmol*L-1,10℃复性48h以上时,复性率较高.纯化后的表达蛋白6B11scFv能与HRP-COC166-9卵巢癌单抗反应并与卵巢癌抗原共同竞争结合卵巢癌单抗COC166-9,抑制率达67%,Western blot显示其相对分子质量为2.8×104,证明纯化后的表达蛋白质,能模拟卵巢癌抗原与卵巢癌单抗特异结合.结论:以包涵体表达的6B11scFv,经溶解复性纯化后,纯度高,活性好.
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