【摘 要】
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目的初步探讨子宫内膜癌细胞中干细胞样 (SP) 细胞对醋酸甲羟孕酮 (MPA) 的抵抗作用及其机制。方法 (1) 采用流式细胞仪Hoechst 33342 (是一种荧光染色液) 染色法分选子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞中的SP细胞 (即Ishikawa-SP细胞) 和非SP细胞 (即Ishikawa-non-SP细胞),采用平板克隆形成实验、免疫组化法分别检测Ishikawa-SP和Ishi
【机 构】
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目的初步探讨子宫内膜癌细胞中干细胞样 (SP) 细胞对醋酸甲羟孕酮 (MPA) 的抵抗作用及其机制。
方法 (1) 采用流式细胞仪Hoechst 33342 (是一种荧光染色液) 染色法分选子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞中的SP细胞 (即Ishikawa-SP细胞) 和非SP细胞 (即Ishikawa-non-SP细胞),采用平板克隆形成实验、免疫组化法分别检测Ishikawa-SP和Ishikawa-non-SP细胞的集落形成率及乳腺癌耐药蛋白 (BCRP) 的表达。 (2) 不同浓度 (分别为5、10、15、20μmol/L) 的MPA处理Ishikawa-SP、Ishikawa-non-SP、Ishikawa细胞不同时间 (分别为24、48、72 h) 后,采用甲烷硫代磺酸盐 (MTS) 法检测3种细胞生长的抑制率,选择Ishikawa细胞生长的抑制率最接近50%时MPA的处理浓度和时间 (即为10μmol/L的MPA处理72 h时) 用于以下实验。 (3) 以10μmol/L的MPA处理Ishikawa-SP、Ishikawa-non-SP、Ishikawa细胞72 h后,采用流式细胞仪检测3种细胞的凋亡率,采用免疫组化法检测3种细胞中凋亡蛋白———半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (caspase-3) 的表达。
结果 (1) 子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞中存在少量SP细胞,其比例为2.7%;Ishikawa-SP和Ishikawa-non-SP细胞的集落形成率分别为 (6.02±1.17) %、 (0.53±0.20) %,两者比较,差异有统计学意义 (P=0.001) ;Ishikawa-SP和Ishikawa-non-SP细胞中BCRP蛋白表达的综合得分分别为 (16.3±2.0) 、 (13.4±1.5) 分,两者比较,差异有统计学意义 (P=0.001) 。 (2) Ishikawa-SP、Ishikawa-non-SP及Ishikawa细胞生长的抑制率,随着MPA浓度的增加和处理时间的延长均增加,呈明显的浓度和时间依赖性 (P<0.05) 。其中,MPA对Ishikawa-SP细胞的抑制作用最弱。 (3) 以10μmol/ L的MPA处理72 h后,Ishikawa-SP、Ishikawa-non-SP、Ishikawa细胞的凋亡率分别为 (4.01±0.43) %、 (9.30±0.67) %、 (4.64±0.18) %,3者间比较,差异有统计学意义 (P<0.05) ;3种细胞中caspase-3蛋白表达的综合得分分别为 (14.9±1.1) 、 (16.1±1.0) 、 (15.5±1.2) 分,3者间比较,差异有统计学意义 (P<0.05) 。
结论MPA对Ishikawa、Ishikawa-SP、Ishikawa-non-SP细胞的生长均有抑制作用,但Ishikawa-SP细胞的生长抑制率及凋亡率均明显低于Ishikawa和Ishikawa-non-SP细胞,显示Ishikawa-SP细胞具有孕激素抵抗的特性,其抵抗机制可能与肿瘤干细胞的耐药性和细胞凋亡有关。
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