探讨泛耐药肺炎克雷伯菌JM45株β-内酰胺酶基因的携带情况。
方法肺炎克雷伯菌JM45株分离自2010年4月浙江大学医学院附属第二医院重症监护病房患者的血液样本。采用E-test法检测该菌株对26种抗菌药物的敏感性，用Cica-β-Test法检测β-内酰胺酶，改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型，聚合酶链反应(PCR)、DNA测序以及BLAST比对等方法确定菌株耐药基因型，用Roche 454高通量测序技术对JM45株做全基因组测序(完成图)，全面分析β-内酰胺酶基因携带状况。
结果除多黏菌素B和替加环素外，肺炎克雷伯菌JM45株对包括头孢菌素类、碳青霉烯类在内的其他24种药物均耐药。Cica-β-Test法显示该菌株同时产多种β-内酰胺酶，改良Hodge试验阳性。常规PCR法检出TEM-1、SHV-11、CTX-M-24、VEB-3基因，但未检出碳青霉烯酶基因和金属酶基因。全基因组测序得到一条完整的基因组(染色体)序列(GenBank登录号：CP006656)及两条质粒序列(GenBank登录号：CP006657，CP006658)。在质粒1中发现了CTX-M-24(全基因组Locus tag：N559_5233)、TEM-1(全基因组Locus tag：N559_5242)和VEB-3(全基因组Locus tag：N559_5248)。CTX-M-24位于插入序列中，排序为IS903-CTX-M-24-ISEcp1；TEM-1位于转座子中，排序为tnpA-TEM-1-rmtB；VEB-3位于转座子中，排序为VEB-3-tnpA。在基因组(染色体)中发现了SHV-11(全基因组Locus tag：N559_2715)，并发现4种推导的β-内酰胺酶基因或β-内酰胺酶结构域序列，分别为：(1)金属β-内酰胺酶结构域蛋白序列(全基因组Locus tag：N559_0119，长度为780 bp)；(2)推导的β-内酰胺酶序列(全基因组Locus tag：N559_1633，长度为1 308 bp)；(3)β-内酰胺酶结构域蛋白序列(全基因组Locus tag：N559_2279，长度为813 bp)；(4)β-内酰胺酶结构域蛋白序列(全基因组Locus tag：N559_3769，长度为1 101 bp)。在SHV-11基因的相邻位置未发现插入序列或转座酶基因。
结论肺炎克雷伯菌JM45株对头孢菌素类、碳青霉烯类等β-内酰胺类抗菌药物耐药与携带TEM-1、SHV-11、CTX-M-24、VEB-3四种β-内酰胺酶基因及四种推导的β-内酰胺酶基因或β-内酰胺酶结构域序列相关。