【摘 要】
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[目的]构建大鼠His-PIAS3真核表达载体，将His-PIAS3于体外进行表达纯化，并对PIAS3进行生物信息学分析。[方法]采用分子克隆构建His-PIAS3-pcDNA3.1真核表达载体，之后转染入HEK293细胞进行表达，考马斯亮蓝染色检测整体蛋白变化，免疫印迹鉴定His-PIAS3蛋白表达及细胞整体蛋白SUMO化，镍柱纯化His-PIAS3蛋白。生物信息学方法分析大鼠PIAS3蛋白的理
【机 构】
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徐州医科大学江苏省脑病生物信息重点实验室生物化学与分子生物学研究中心
【基金项目】
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江苏省高等学校自然科学研究重大项目（20KJA310010）； 国家自然科学基金项目（81100852）；
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[目的]构建大鼠His-PIAS3真核表达载体，将His-PIAS3于体外进行表达纯化，并对PIAS3进行生物信息学分析。[方法]采用分子克隆构建His-PIAS3-pcDNA3.1真核表达载体，之后转染入HEK293细胞进行表达，考马斯亮蓝染色检测整体蛋白变化，免疫印迹鉴定His-PIAS3蛋白表达及细胞整体蛋白SUMO化，镍柱纯化His-PIAS3蛋白。生物信息学方法分析大鼠PIAS3蛋白的理化性质、亲疏水性、二级结构及序列的保守性。[结果] His-PIAS3目的基因扩增成功，且亚克隆入pcDNA3.1载体；和空载体组相比，转染His-PIAS3-pcDNA3.1组PIAS3蛋白表达水平明显增加，且整体蛋白的SUMO化水平显著升高；镍柱纯化可获得较高纯度的His-PIAS3蛋白。生物信息学结果显示，大鼠PIAS3蛋白包含628个氨基酸残基，分子量为68.3 kDa,理论等电点为8.05,亲水性平均值为-0.242;PIAS3主要定位于膜内；PIAS3蛋白的二级结构主要由18.79%α-螺旋、13.69%延伸链和67.52%无规卷曲组成；不同物种间pias3序列相似性均在70%以上。[结论] His-PIAS3真核表达载体构建成功；His-PIAS3可在HEK293细胞中高效表达，具有较高酶活性；获得较高纯度His-PIAS3蛋白；PIAS3主要定位于核内，为碱性、亲水性不稳定蛋白，具有高度保守性。
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