大鼠His-Akt1重组蛋白的真核表达、蛋白纯化及活性鉴定

来源 :生物技术通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：xiaohonghe

【摘要】

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构建His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体,于HEK293细胞进行表达,Ni-NTA亲和纯化His-Akt1,并对Akt1进行活性鉴定。以Akt1(全长)-pcDNA3.1重组体为模板,采用PCR扩增目的基因,然后克

【作者】

：

孟利杜彩萍

【机构】

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徐州医科大学

【出处】

：

生物技术通报

【发表日期】

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2020年12期

【关键词】

：

AKT1 真核表达载体蛋白纯化活性鉴定 Akt1eukaryotic expression vectorprotein purificationactivi

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目(81100852),江苏省徐州市科技计划项目(KC18205)

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构建His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体,于HEK293细胞进行表达,Ni-NTA亲和纯化His-Akt1,并对Akt1进行活性鉴定。以Akt1(全长)-pcDNA3.1重组体为模板,采用PCR扩增目的基因,然后克隆入真核表达载体pcDNA3.1;将His-Akt1-pcDNA3.1转染HEK293细胞表达,Ni-NTA纯化His-Akt1,用SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色及免疫印迹鉴定蛋白纯度;蛋白经透析后,免疫印迹检测Akt1 Ser473和Thr308磷酸化水平。His-Akt1-pcD

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