【目的】分析河北省奶牛源大肠杆菌的致病性及中草药体外抑菌效果。【方法】于河北省收集30份具有典型临床症状的奶牛粪便样品，对样品进行细菌培养观察、生化鉴定、血清型鉴定、透射电镜观察、PCR扩增及致病性研究。采用传统煎煮法与醇提法提取9种中草药，通过96孔板-二倍稀释平板法测定最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）及最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）,筛选出抑菌效果较强的中草药；将中草药进行两两联合，采用牛津杯法测定抑菌圈直径（inhibition zone diameter, IZD）,并通过96孔板-二倍稀释平板法测定MIC和MBC,评价药物的抑菌效果。【结果】分离获得12株奶牛源大肠杆菌，检出率为40%,均具有致病性，其优势血清型为O55,检出率为58.3%。在中草药水提取液中，五倍子、五味子抑菌效果最强，MIC和MBC均为7.80 mg/mL,其次为乌梅、夏枯草、石榴皮，具有较好的抑菌效果，MIC和MBC均为15.63 mg/mL;在中草药醇提取液中，五倍子抑菌效果最强，MIC和MBC均为3.97 mg/mL,其次为五味子抑菌效果较好，MIC和MBC均为7.80 mg/mL。在中草药两两联合中，五味子与乌梅联合用药表现出协同作用，抑菌效果最强，IZD为26.00 mm, MIC和MBC均为3.97 mg/mL,其次为五倍子与乌梅，IZD为23.66 mm, MIC和MBC均为7.80 mg/mL。【结论】本研究成功分离到具有致病性的大肠杆菌，优势血清型为O55型，筛选出抑菌效果较好的单味及复方中草药，为大肠杆菌引起的奶牛腹泻临床应用中药防治提供科学依据。