【摘 要】
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目的 探讨酸性环境对肾小管上皮细胞(TEC)内自噬-溶酶体通路的影响.方法 在体外细胞实验中,利用不同pH值(7.4、7.0、6.6、6.2)培养基培养人TEC(HK-2).采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的活力;采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞内自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ和p62的表达情况,以及溶酶体新生转录因子EB(TFEB)的表达情况;利用串联荧光蛋白质粒tfGal3转染、激光共聚焦显微镜观察,检测各组细胞溶酶体损伤情况.结果 MTT检测结果显示,pH 6.6组与pH
【机 构】
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广东医科大学附属医院肾病研究所 湛江市慢性肾脏病防治重点实验室,广东 湛江524001
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目的 探讨酸性环境对肾小管上皮细胞(TEC)内自噬-溶酶体通路的影响.方法 在体外细胞实验中,利用不同pH值(7.4、7.0、6.6、6.2)培养基培养人TEC(HK-2).采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的活力;采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞内自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ和p62的表达情况,以及溶酶体新生转录因子EB(TFEB)的表达情况;利用串联荧光蛋白质粒tfGal3转染、激光共聚焦显微镜观察,检测各组细胞溶酶体损伤情况.结果 MTT检测结果显示,pH 6.6组与pH 6.2组HK-2细胞活力明显低于pH 7.4组[(87.69±9.91)％、(75.06±9.62)％比(100.00±9.59)％](P<0.05).蛋白免疫印迹法检测结果显示,与pH 7.4组相比,pH 7.0组LC3-Ⅱ表达升高(1.21±0.10比1.00±0.05,P<0.01),而pH 7.0组与pH 6.6组细胞内p62表达均显著下降(0.76±0.03、0.76±0.09比1.00±0.05,P0.05).利用串联荧光蛋白tfGal3转染细胞进行荧光观察发现,与pH 7.4组和pH 7.0组相比,pH 6.6组和pH 6.2组细胞内黄色荧光颗粒增多,红色荧光颗粒则几乎完全消失.蛋白免疫印迹检测结果显示,pH 6.2组细胞内TFEB表达显著低于pH 7.4组和pH 7.0组(0.77±0.10比1.00±0.03、1.04±0.07,P<0.01).结论 酸性环境可能通过干扰自噬-溶酶体通路造成TEC活力下降.
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肝硬化是临床常见的慢性进行性肝脏疾病,严重危害人类生命健康.肝移植手术是终末期肝硬化最有效的治疗方式,但供体短缺、手术费用昂贵以及术后并发症等限制了其临床广泛应用.近年来,随着再生医学研究的不断进展,以胚胎干细胞、诱导性多能干细胞、间充质干细胞(MSCs)为主的干细胞移植在肝硬化治疗领域越来越受关注.MSCs治疗肝硬化的机制主要包括其可转化为肝细胞样细胞、调节机体免疫反应以及旁分泌等.目前关于MSCs移植治疗肝硬化已开展了多项临床试验,其有效性和安全性均较理想.相信随着研究的发展,以MSCs移植为代表的干
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经皮冠状动脉介入(PCI)是目前治疗冠心病的重要手段之一,而支架内再狭窄(ISR)已成为影响PCI疗效的主要因素.ISR是一个复杂的病理生理过程,其发生是患者自身相关因素、冠状动脉病变特点相关因素、介入相关因素和遗传相关因素等作用引起内皮损伤及功能失调,导致病理性内膜增生,但具体机制尚不明确,且缺乏标准化治疗策略.降低ISR的发生率需要积极预防并控制相关危险因素,也亟待医患双方的共同重视以及分子生物学、科技、药物和介入治疗等领域的进一步发展.
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