【摘 要】
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目的探讨环孢菌素A（CsA）对肾小管上皮细胞（TEC）自噬-溶酶体通路的影响。方法不同浓度（3、5、10 μmol/L）CsA刺激人近端肾小管上皮（HK-2）细胞24 h。用MTT法检测细胞活力；AnnexinV-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；免疫荧光法检测细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ和p62表达；共聚焦显微镜下观察mRFP-GFP串联荧光标记LC3（tfLC3）质粒转染HK
【机 构】
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524001 湛江，广东医科大学附属医院肾病研究所 湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,524001 湛江，广东医科大学附属医院肾病研究所 湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,524001 湛江，广东医科大学
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目的探讨环孢菌素A（CsA）对肾小管上皮细胞（TEC）自噬-溶酶体通路的影响。
方法不同浓度（3、5、10 μmol/L）CsA刺激人近端肾小管上皮（HK-2）细胞24 h。用MTT法检测细胞活力；AnnexinV-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；免疫荧光法检测细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ和p62表达；共聚焦显微镜下观察mRFP-GFP串联荧光标记LC3（tfLC3）质粒转染HK-2细胞后自噬体与溶酶体融合及降解情况；用流式细胞术检测HK-2细胞溶酶体对DQ-卵清蛋白的消化能力。
结果与对照组相比，5、10 μmol/L CsA组细胞活力下降（均P<0.01）；细胞凋亡数增多（均P<0.05）。与对照组相比，3、5、10 μmol/L CsA组细胞LC3-Ⅱ和p62表达增加（均P<0.05）；自噬体降解受阻；细胞溶酶体消化DQ-卵清蛋白能力下降（均P<0.01）。
结论CsA通过损害溶酶体功能而阻滞肾小管上皮细胞自噬通路，可能是CsA肾病的发生机制之一。
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