【摘 要】
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目的在杆状病毒中表达寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)包膜蛋白(Envelope protein，E蛋白)。方法人工合成ZIKV E基因全长序列(1 518 bp)，并克隆到pFastBac1载体上，得到重组杆状病毒转移载体pFB1-E，转化含DH10Bac感受态细胞，获得骨架质粒rBacmid-E，转染sf9细胞，得到重组杆状病毒rBac-E。检测病毒滴度，PCR法检测E基因的插入，间接
【机 构】
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100052 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,100052 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,100052 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,100052 北京，中国疾
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目的在杆状病毒中表达寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)包膜蛋白(Envelope protein，E蛋白)。
方法人工合成ZIKV E基因全长序列(1 518 bp)，并克隆到pFastBac1载体上，得到重组杆状病毒转移载体pFB1-E，转化含DH10Bac感受态细胞，获得骨架质粒rBacmid-E，转染sf9细胞，得到重组杆状病毒rBac-E。检测病毒滴度，PCR法检测E基因的插入，间接免疫荧光和Western blot法检测E蛋白的表达。
结果经PCR方法鉴定，重组杆状病毒骨架质粒构建成功，重组病毒rBac-E(第3代)病毒滴度为2.58×105 pfu/ml。提取感染rBac-E的sf9细胞基因组，经PCR扩增得到3 830 bp的条带，间接免疫荧光检测出现特异性绿色荧光。Western blot鉴定可见感染重组杆状病毒rBac-E的细胞沉淀中在相对分子质量55×103处有特异性条带。
结论在杆状病毒表达系统中重组表达了ZIKV E蛋白，为ZIKV E蛋白功能研究及疫苗的开发奠定了基础。
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