【摘 要】
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目的 初步探索1,9-二取代β-咔啉(CZY1-4)在头颈部鳞状细胞癌中抗肿瘤机制的研究.方法 CZY1-4是一种新合成的1,9-二取代β-咔啉,具有抗肿瘤潜力.采用CCK-8实验经过CZY1-4浓度梯度(0、2、4、6、10、15、20、25、30、40 μmol/L)处理24 h后检测细胞活力,筛选出两种对药物较为敏感的头颈部鳞状细胞癌细胞系:喉癌细胞系Tu177与舌癌细胞系Cal-27为主要研究对象.以浓度梯度(0、2、4、6、8 μmol/L)进行克隆形成实验检测细胞集落形成能力;随后分别以2 μ
【机 构】
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武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科,湖北武汉 430000;武汉大学生命科学学院,湖北武汉 430000;中山大学化学与化学工程学院,广东广州 510070
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目的 初步探索1,9-二取代β-咔啉(CZY1-4)在头颈部鳞状细胞癌中抗肿瘤机制的研究.方法 CZY1-4是一种新合成的1,9-二取代β-咔啉,具有抗肿瘤潜力.采用CCK-8实验经过CZY1-4浓度梯度(0、2、4、6、10、15、20、25、30、40 μmol/L)处理24 h后检测细胞活力,筛选出两种对药物较为敏感的头颈部鳞状细胞癌细胞系:喉癌细胞系Tu177与舌癌细胞系Cal-27为主要研究对象.以浓度梯度(0、2、4、6、8 μmol/L)进行克隆形成实验检测细胞集落形成能力;随后分别以2 μmol/L与4 μmol/L的CZY1-4处理Tu177与Cal-27 24 h后进行划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞术分析细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞相关蛋白表达量变化,免疫荧光实验检测细胞内自噬小体形成情况等.结果 经过上述浓度的CZY1-4处理24 h后,各头颈部鳞状细胞癌细胞系的生长增殖均受到不同程度的抑制,且呈剂量依赖性,其中Tu177与Cal-27抑制效果更为显著,两者的克隆形成能力也被显著抑制(P＜0.05);Tu177与Cal-27的迁移能力被显著抑制(P＜0.01);Tu177与Cal-27的侵袭能力被显著抑制(P＜0.001);Tu177与Cal-27凋亡率变化无显著差异(P＞0.05);自噬相关蛋白ATG5与LC3B,Benclin1蛋白表达量增加,呈剂量依赖性;自噬小体形成显著增加(P＜0.01);药物对被敲除ATG5后的Cal-27 生长、增殖的抑制作用显著减弱(P＜0.01).结论 CZY1-4能显著抑制头颈部鳞状细胞癌相关细胞系的生长、增殖作用,并抑制细胞克隆形成、侵袭和迁移,具有一定的抗肿瘤活性,通过实验初步验证该药物主要通过调控ATG5促进细胞自噬的发生进而发挥抗肿瘤效果.
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