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摘要：目的 研究新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic ischemic encephalopathy HIE）患儿血清中金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9 MMP-9）、NO（nitric oxide）水平的动态变化，探讨金属蛋白酶-9、NO水平和新生儿脑缺氧缺血后脑损伤程度之间的關系。方法 选用HIE患者40例，采用酶联免疫吸附法（ELISA法）及硝酸还原法测定其发病后1 d、3 d、7 d血清MMP-9、NO浓度，与健康对照组比较。结果 HIE患者血清MMP-9、NO水平与对照组水平比较均升高，差异有统计学意义（P<0.05），以发病3 d水平升高尤著，此后呈降低趋势。重度HIE患者发病后3 d血清MMP-9水平高于中、轻度组（F=5.119，P<0.05），3组之间比较差异均有统计学意义。结论 HIE患者血清MMP-9、NO水平升高，提示MMP-9、NO可能参与了HIE的发病机制。程度越重，血清MMP-9、NO升高越明显。血清MMP-9、NO水平变化和脑损伤程度有关，可能对病情的严重程度和预后有预示作用。
关键词：新生儿；缺氧缺血；明胶酶B；NO
新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic ischemic encephalopathyHIE）是儿科临床上常见的一种神经系统疾病。既往人们对其发病机制进行了广泛研究，近年来基MMP-9、NO与HIE的关系逐渐为人们所重视。本研究旨在对40例HIE的新生儿和20例对照新生儿的血清MMP-9、NO水平进行动态观察，以探讨其在HIE病程中的作用及临床意义。
1 材料与方法
1.1 实验对象 HIE组：2012年1月至2013年6月期间在我院儿科住院、围生期有窒息并经临床或头颅CT证实有HIE的患儿40例，其中轻度15例，中度13例，重度12例。符合2005年中华医学会儿科分会新生儿学组制定的依据和临床分度标准[1]，其中男23例，女17例。对照组：同期产科足月新生儿20例，均无窒息史、严重感染史及神经系统疾病，该组患儿胎龄及获取血清时的日龄与HIE组比较，差异无显著性。
1.2 实验试剂与仪器 MMP-9、NO定量ELISA试剂盒：购于南京建成试剂公司进口分装美国PDL公司产品。BIO-RAD680型酶标仪（美国伯乐实验技术公司）、80-2型离心沉淀机（上海香术器械厂）、冷冻冰箱、恒温水浴箱等，硝酸。
1.3 实验方法 患儿入院后24 h内（急性期）、3 d（高峰期）、7 d（恢复期）各采取股静脉血4 ml，分离血清后置-20℃保存待测。MMP-9的测定采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法；NO的测定采用硝酸还原法。
1.4 统计学处理
计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 12.0统计软件进行统计处理。
2 结果
2.1 HIE组与对照组血清MMP-9、NO水平比较 HIE血清MMP-9、NO水平较对照组明显升高，差异有统计学意义。以发病后3 d水平升高尤著，此后呈逐渐下降趋势。与对照组相比，均P<0.05。
2.2 HIE病情轻重程度与患者血清MMP-9的关系
病变程度不同的各组发病后3 d患者血清MMP-9、NO水平，结果显示3组之间差异有统计学意义（P<0.05）。
重度HIE组高于中、轻度HIE组（P<0.05）。对患儿的病情轻重程度与发病后3 d血清MMP-9、NO水平进行Spesrman等级相关分析，结果显示二者呈显著正相关，相关系数（s=0.532，P=0.007）。
3 讨论
NO是中枢神经系统的生理信使，NO作为脑血管舒缩主要调节因子，在脑缺血一再灌注损伤中具有重要作用。NO过量生成或在病理性刺激时能产生神经毒性。新生儿窒息是HIE的基础，缺氧影响脑组织血管的正常灌注和微循环，而致缺氧缺血性脑损伤[2]。NO增加则通过毒性作用，自由基的损伤而加重脑缺血-再灌注损伤，导致神经死亡。MMPs是锌、钙依赖性蛋白水解酶家族，其功能是降解和重塑EMC，维持EMC的动态平衡。近年来，有人发现脑缺血及再灌注后出现MMPs增加，尤其是MMP- 9和MMP- 2活性增加与脑血管通透性、BBB通透性、BBB崩溃、炎细胞侵入和脑水肿明显相关。本研究结果显示，与对照组相比，HIE患者血清MMP-9、NO水平于发病后1 d、3 d、7 d均升高，其发病后3 d水平升高尤著，可能与MMP-9导致BBB通透性增强、BBB崩溃及NO合成酶升高有关，进一步证实MMP-9、NO水平与HIE严重程度有关，即缺氧时间越长，脑损伤越重，MMP-9、NO水平越高。故MMP-9、NO水平亦可作为预测HIE预后的一个重要指标。MMP-9、NO为新生儿缺氧缺血性脑病的治疗提供了新靶标，其在临床的意义与应用价值有着广阔的研究前景。
参考文献：
[1]中华医学会儿科学分会新生儿组.新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准.中华儿科杂志2005，43（8）：584.
[2]殷宪敏，史宝海，杨晓雯，等.硫酸镁、脑复素、高压氧治疗HIE疗效观察.实用儿科临床杂志，2002，17（6）：678-680.
关键词：新生儿；缺氧缺血；明胶酶B；NO
新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic ischemic encephalopathyHIE）是儿科临床上常见的一种神经系统疾病。既往人们对其发病机制进行了广泛研究，近年来基MMP-9、NO与HIE的关系逐渐为人们所重视。本研究旨在对40例HIE的新生儿和20例对照新生儿的血清MMP-9、NO水平进行动态观察，以探讨其在HIE病程中的作用及临床意义。
1 材料与方法
1.1 实验对象 HIE组：2012年1月至2013年6月期间在我院儿科住院、围生期有窒息并经临床或头颅CT证实有HIE的患儿40例，其中轻度15例，中度13例，重度12例。符合2005年中华医学会儿科分会新生儿学组制定的依据和临床分度标准[1]，其中男23例，女17例。对照组：同期产科足月新生儿20例，均无窒息史、严重感染史及神经系统疾病，该组患儿胎龄及获取血清时的日龄与HIE组比较，差异无显著性。
1.2 实验试剂与仪器 MMP-9、NO定量ELISA试剂盒：购于南京建成试剂公司进口分装美国PDL公司产品。BIO-RAD680型酶标仪（美国伯乐实验技术公司）、80-2型离心沉淀机（上海香术器械厂）、冷冻冰箱、恒温水浴箱等，硝酸。
1.3 实验方法 患儿入院后24 h内（急性期）、3 d（高峰期）、7 d（恢复期）各采取股静脉血4 ml，分离血清后置-20℃保存待测。MMP-9的测定采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法；NO的测定采用硝酸还原法。
1.4 统计学处理
计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 12.0统计软件进行统计处理。
2 结果
2.1 HIE组与对照组血清MMP-9、NO水平比较 HIE血清MMP-9、NO水平较对照组明显升高，差异有统计学意义。以发病后3 d水平升高尤著，此后呈逐渐下降趋势。与对照组相比，均P<0.05。
2.2 HIE病情轻重程度与患者血清MMP-9的关系
病变程度不同的各组发病后3 d患者血清MMP-9、NO水平，结果显示3组之间差异有统计学意义（P<0.05）。
重度HIE组高于中、轻度HIE组（P<0.05）。对患儿的病情轻重程度与发病后3 d血清MMP-9、NO水平进行Spesrman等级相关分析，结果显示二者呈显著正相关，相关系数（s=0.532，P=0.007）。
3 讨论
NO是中枢神经系统的生理信使，NO作为脑血管舒缩主要调节因子，在脑缺血一再灌注损伤中具有重要作用。NO过量生成或在病理性刺激时能产生神经毒性。新生儿窒息是HIE的基础，缺氧影响脑组织血管的正常灌注和微循环，而致缺氧缺血性脑损伤[2]。NO增加则通过毒性作用，自由基的损伤而加重脑缺血-再灌注损伤，导致神经死亡。MMPs是锌、钙依赖性蛋白水解酶家族，其功能是降解和重塑EMC，维持EMC的动态平衡。近年来，有人发现脑缺血及再灌注后出现MMPs增加，尤其是MMP- 9和MMP- 2活性增加与脑血管通透性、BBB通透性、BBB崩溃、炎细胞侵入和脑水肿明显相关。本研究结果显示，与对照组相比，HIE患者血清MMP-9、NO水平于发病后1 d、3 d、7 d均升高，其发病后3 d水平升高尤著，可能与MMP-9导致BBB通透性增强、BBB崩溃及NO合成酶升高有关，进一步证实MMP-9、NO水平与HIE严重程度有关，即缺氧时间越长，脑损伤越重，MMP-9、NO水平越高。故MMP-9、NO水平亦可作为预测HIE预后的一个重要指标。MMP-9、NO为新生儿缺氧缺血性脑病的治疗提供了新靶标，其在临床的意义与应用价值有着广阔的研究前景。
参考文献：
[1]中华医学会儿科学分会新生儿组.新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准.中华儿科杂志2005，43（8）：584.
[2]殷宪敏，史宝海，杨晓雯，等.硫酸镁、脑复素、高压氧治疗HIE疗效观察.实用儿科临床杂志，2002，17（6）：678-680.