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目的 构建敲减死亡相关蛋白激酶1（shDAPK1）基因的慢病毒质粒及稳转神经母细胞瘤细胞系（SH-SY5Y），并检测SH-SY5Y细胞中DAPK1敲减后对细胞凋亡的影响。方法 设计并合成特异性敲减DAPK1基因的上下游引物，将引物退火后与双酶切PLKO.1载体经T4连接酶连接、转化、提取质粒并进行DNA测序，获得重组正确的慢病毒干扰质粒pLKO.1-shDAPK1。将该重组的质粒与辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染HEK293T细胞，72 h后收集慢病毒上清液，感染SH-SY5Y细胞，利用嘌呤霉素进行阳性筛选，得到稳定敲减DAPK1的SH-SY5Y细胞系。利用Western blot检测SH-SY5Y稳转细胞系中DAPK1蛋白以及用1-甲基-4-苯基-吡啶离子（MPP+）处理后的Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表达水平，并应用流式细胞术检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。结果 重组pLKO.1-shDAPK1质粒的测序比对结果正确，嘌呤霉素筛选后获得shDAPK1稳转SH-SY5Y细胞系（shDAPK1-SY5Y），该稳转细胞系中DAPK1蛋白表达水平与对照组相比显著下降，此外还上调了Bcl-2蛋白的表达，下调Bax、Caspase-3蛋白的表达且流式检测结果显示该细胞系凋亡发生率明显下降。结论 成功构建了慢病毒敲减质粒pLKO.1-shDAPK1，并建立了DAPK1低表达的SH-SY5Y稳定感染细胞系，明显抑制了细胞凋亡。