【摘 要】
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目的 构建多房棘球绦虫钙网蛋白(EmCRT)的真核表达载体,鉴定重组EmCRT蛋白在Hela细胞中的表达,并对其进行T、B细胞表位预测等生物信息学分析. 方法 根据多房棘球绦虫钙网蛋白
【机 构】
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内蒙古科技大学包头医学院基础医学与法医学院病原生物学教研室,内蒙古包头014060;厦门大学生命科学学院寄生动物研究室
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目的 构建多房棘球绦虫钙网蛋白(EmCRT)的真核表达载体,鉴定重组EmCRT蛋白在Hela细胞中的表达,并对其进行T、B细胞表位预测等生物信息学分析. 方法 根据多房棘球绦虫钙网蛋白基因序列设计特异引物,以多房棘球绦虫原头蚴cDNA为模板,PCR扩增EmCRT基因片段.将此片段插入真核表达载体pcDNA3.3-HA,构建重组质粒pcDNA3.3-HA-EmCRT,并将PCR、酶切和测序鉴定正确的质粒转染Hela细胞,应用Western blot和细胞免疫荧光法检测重组EmCRT蛋白在细胞中的表达.利用ProtParam预测EmCRT的理化性质,SignalP 4.1 Server预测其信号肽序列,PSORT Ⅱ Prediction预测其亚细胞定位,TMHMM 2.0预测其跨膜结构域,SOPMA和SWISS-MODEL预测其二、三级结构,DNAStar软件分析其亲水性、柔韧性、抗原指数以及表面可及性,并推测可能的B细胞表位;采用SYF-PEUTHI的T细胞表位预测工具分别预测细胞毒性T细胞(CTL)和辅助T细胞(Th)表位. 结果 成功构建了Em-CRT的真核表达载体,经Western blot和细胞免疫荧光检测EmCRT在Hela细胞中高效表达.EmCRT蛋白的相对分子质量为45.44×103,等电点为4.47,预测该蛋白含有1个信号肽序列和1个跨膜区域,可能定位于细胞质,具有6个T、B细胞联合表位,分别为51-88 aa、112-154 aa、149-178 aa、185-198 aa、244-263 aa、280-309 aa. 结论 真核表达的重组多房棘球绦虫钙网蛋白相对分子质量为45.44×103,预测含有T、B细胞表位,为高效抗多房棘球绦虫表位疫苗的研发奠定了基础.
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