【摘 要】
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为实现烟草拟茎点霉的快速准确检测，利用真菌rDNA-ITS通用引物对拟茎点霉和其他10种烟草病原菌基因组DNA进行了PCR扩增、片段回收及DNA测序，在序列比对基础上设计了两对特异性检测引物，并鉴定了引物的检测灵敏度和特异性，同时优化建立了PCR反应体系。结果表明，在退火温度为60 ℃时，两对特异性引物P2F/P3R和P3F/P3R从烟草拟茎点霉DNA样本中分别扩增出来420 bp和381 bp的
【基金项目】
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河南省高等学校重点科研项目“烟草镰刀菌根腐病发生相关根系微生物群落解析与生防菌筛选研究”（20B210009）； 中国烟草总公司河南省公司科技项目“烟草根腐病害发生的微生物群落分析和生态风险预警研究”（2020410000270012）； 河南农业大学教学实验室开放创新项目“烟草真菌类病害的快速分子检测方法研究”（KF20
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为实现烟草拟茎点霉的快速准确检测，利用真菌rDNA-ITS通用引物对拟茎点霉和其他10种烟草病原菌基因组DNA进行了PCR扩增、片段回收及DNA测序，在序列比对基础上设计了两对特异性检测引物，并鉴定了引物的检测灵敏度和特异性，同时优化建立了PCR反应体系。结果表明，在退火温度为60 ℃时，两对特异性引物P2F/P3R和P3F/P3R从烟草拟茎点霉DNA样本中分别扩增出来420 bp和381 bp的特异性条带，而在其他10种烟草病原菌DNA以及阴性对照中均不能扩增到任何条带。两对特异性引物的检测灵敏度均达到10 pg/μL。建立的基于两对特异性引物P2F/P3R和P3F/P3R的分子检测方法可实现对病原菌烟草拟茎点霉的快速准确检测。
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