【摘 要】
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目的 探讨miR-124修饰的大鼠牙髓干细胞（rDPSCs）来源外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法 从SD大鼠牙髓中分离出rDPSCs,流式细胞术鉴定rDPSCs表面标志物CD14、CD34、CD45、CD90、CD105、CD146的阳性比率；油红O染色、茜素红S染色观察rDPSCs成脂成骨能力。利用细胞转染技术将miR-124模拟物（miR-124 mimics）及其阴性对照（miR-NC）转染
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目的 探讨miR-124修饰的大鼠牙髓干细胞（rDPSCs）来源外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法 从SD大鼠牙髓中分离出rDPSCs,流式细胞术鉴定rDPSCs表面标志物CD14、CD34、CD45、CD90、CD105、CD146的阳性比率；油红O染色、茜素红S染色观察rDPSCs成脂成骨能力。利用细胞转染技术将miR-124模拟物（miR-124 mimics）及其阴性对照（miR-NC）转染于rDPSCs,分组为空白组、miR-NC组、miR-124组，并提取转染后rDPSCs的外泌体，分别命名为Exosome组（Exo组）、Exo/miR-NC组、Exo/miR-124组，透射电镜观察外泌体形态；Western blot检测外泌体标志蛋白CD63和CD81表达水平；qRT-PCR检测rDPSCs及rDPSCs外泌体中miR-124表达水平。将25只大鼠随机分为sham组、model组、rDPSCs Exo组、rDPSCs Exo/miR-NC组和rDPSCs Exo/miR-124组，每组5只，构建皮肤缺损模型，分别于皮肤缺损相应区域注射30μl对应的外泌体进行干预，qRT-PCR检测大鼠创伤组织中miR-124表达水平；ELISA法检测大鼠血清中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、甘露糖受体（CD206）含量；Western blot检测大鼠创伤组织中肿瘤坏死因子（TNF）-α、TNF-1β、白细胞介素（IL）-6、IL-4、IL-10、IL-13蛋白表达。结果 rDPSCs表面标志物CD14、CD34、CD45的阳性比率均低于CD90、CD105、CD146;rDPSCs具有成骨成脂能力；透射电镜可观察到外泌体为大小均一，直径50～100 nm,呈圆形或椭圆形的囊泡结构；CD63和CD81蛋白在rDPSCs外泌体中高表达；与空白组和miR-NC组比较，miR-124组rDPSCs中miR-124表达水平显著升高，且Exo/miR-124组rDPSCs外泌体中miR-124表达水平显著高于Exo组和Exo/miR-NC组（P<0.05）;与sham组比较，model组大鼠血清中iNOS含量、创伤组织中TNF-α、TNF-1β、IL-6蛋白表达显著升高，CD206含量、IL-4、IL-10、IL-13蛋白表达显著降低（P<0.05）;与rDPSCs Exo组和rDPSCs Exo/miR-NC组比较，rDPSCs Exo/miR-124组中iNOS含量、TNF-α、TNF-1β、IL-6蛋白表达显著降低，CD206含量、IL-4、IL-10、IL-13蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论 miR-124过表达修饰的rDPSCs外泌体可通过抑制M1型巨噬细胞极化、促进M2型巨噬细胞极化来调控炎性反应。
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