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疾病已成为现代养猪业的最大威胁,特别是一些人畜共患病的流行也严重影响着人类的健康。开展抗病育种特别是对抗病候选基因的挖掘是摆在育种工作者面前的最为急迫的任务。在本实验室前期工作中,将猪Cav1基因作为一般抗病力的候选基因,对该基因的结构进行了解析,并研究了该基因的转录调控机制,同时分析了该基因在副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)感染猪的过程中的表达变化规律,探究了该基因在Glasser’s病的发病过程中的作用机制。本研究在前期研究的基础上对猪Cav1基因的转录后调控做进一步的探索,并选择乙脑病毒作为感染材料,探究了调控猪Cav1基因的niRNA在乙脑病毒感染PK15细胞中的作用机制,主要取得了以下结果：1.用Targetscan在线软件预测了靶向猪Cav1基因的miRNA,并选择具有保守靶向位点的rniRNA进行生物学验证。双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-124、miR-199a-5p和：miR-199b-5p可以显著降低海肾荧光素酶活性；通过Q-PCR的方法检测到在转染miR-124和niR-199a-5p的细胞中的Cav1基因的mRNA表达显著降低,同时过表达miR-124和miR-199a-5p后,Western blot检钡caveolin-1的表达受到抑制,从而验证了猪Cav1基因是miR-124和miR-199a-5p的靶基因。2. Q-PCR的方法检测了猪Cav1基因和miR-124在成年大白猪12个组织的表达谱,结果表明,Cav1基因在心、肺、脂肪和腿肌中高表达,miR-124在脑组织中特异高表达,而Cav1基因在脑组织中低表达。3.用免疫荧光染色的方法检测了Cav1基因在PK15细胞中的表达情况,结果表明,Cav1基因在PK15细胞中高表达并主要表达于细胞膜,推测PK15细胞的细胞膜上存在大量的caveolae。4.在PK15细胞中转染miR-124模拟物,制作超薄切片并用透射电子显微镜观察细胞的caveolae结构,对细胞膜上的caveolae结构进行统计分析,和对照组相比,转染miR-124的细胞中的caveolae的数量显著减少(P<0.05),说明miR-124可以通过靶向caveolin-1降低细胞膜caveolae的密度。5.在PK15细胞中转染miR-124模拟物后48h感染乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2,感染24h后检测JEV的增殖情况。Western blot和流式细胞仪检测结果表明,和对照组相比,超表达miR-124后乙脑病毒的增殖受到显著抑制(P<0.05)。6.用去除细胞膜胆固醇的化学药物甲基-β-环糊精(MβCD)处理PK15细胞后再感染JEV, IF A和Western blot检测JEV的增殖情况,和未处理组相比,MβCD可以显著抑制JEV的增殖,并且MβCD浓度越大,JEV抑制程度越明显,同时检测MβCD(浓度为10nM)处理的细胞活性并没有显著变化,说明JEV进入PK15细胞依赖于细胞膜上的胆固醇。7.针对Cavl基因和Clathrin heavy chain基因设计siRNA, Western blot检测结果显不,siRNA的敲低效果明显。用这两种siRNA转染PK15细胞,转染48h后感染JEV,感染36h后检测JEV的增殖情况,Western blot口流式细胞仪检测结果表明,和对照(NC)相比,转染针对Cavl基因的siRNA的细胞中JEV的增殖受到轻微的抑制(约10%),但是用阻止caveolae胞吞的药物络氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素(Genistein)处理细胞后,JEV的增殖没有受到影响,说明JEV的侵入不是通过caveolae胞吞途径；而转染针对clathrin heavy chain的siRNA细胞中的JEV的增殖显著降低(P<0.05),说明JEV是通过网格蛋白(Clathrin)介导的胞吞途径进入PK15细胞的。总之,本论文工作为研究猪Cavl基因的转录后调控奠定了基础,对靶向猪Cavl基因的miR-124在乙脑病毒感染中作用的研究也为抗乙脑病毒感染提供了新的靶点。